电化学发光免疫分析法在评价治疗性单抗与FcγRⅠ结合活性中的应用

来源：药物分析杂志2019年第1期北京时间：

作者：徐刚领, 郭莎, 张峰, 于传飞, 王文波, 王兰

单位：中国食品药品检定研究院 单克隆抗体产品室 卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室, 北京 102629

摘要：目的：建立电化学发光免疫分析（electrochemiluminescence immunoassay，ECLI）测定贝伐珠单抗与免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ（FcγRⅠ）结合活性的方法，并评价贝伐珠单抗生物类似药（similar biotherapeutic products，SBP）候选物和其原研药（reference biotherapeutic product，RBP）与FcγRⅠ结合活性的相似性。方法：先使用封闭液对链霉亲和素（streptavidin，SA）预包被的96孔MSD板进行封闭，再将生物素（biotin）标记的FcγRⅠ与之结合，之后加入不同稀释倍数的贝伐珠单抗，最后加入SULFO-TAG（Ru（bpy）32+）标记的羊抗人检测抗体上机读数。按照试验设计分别对FcγRⅠ浓度、单抗样品初始浓度、倍比稀释倍数、检测抗体浓度等试验参数进行优化，并对优化后方法的准确性和精密性进行初步验证，还将建立的方法用于评价贝伐珠单抗SBP候选药和RBP与FcγRⅠ结合活性的相似性。结果：采用优化后的方法检测，贝伐珠单抗与FcγRⅠ的结合呈现良好的剂量效应曲线，R2>0.99。该方法具有较好的准确性和精密性，靶值为50%~150%样品的回收率在95.2%~103.7%之间；RSD均小于10%。贝伐珠单抗SBP候选药与FcγRⅠ的相对结合活性均在为RBP相对结合活性均值±3SD之间。结论：电化学发光免疫分析法能够用于评价抗体与FcγRⅠ的结合活性，并可应用于对SBP候选药和RBP与FcγRⅠ结合活性的相似性分析。该方法的灵敏度和准确性较好，为评价抗体与FcγRⅠ的结合提供了新的技术手段。  

关键词：单克隆抗体;贝伐珠单抗;免疫球蛋白G Fc段受体Ⅰ（FcγRⅠ）;电化学发光免疫分析（ECLI）;结合活性,