不同种属小鼠用于淋巴细胞增殖试验的比较研究

来源：药物分析杂志2019年第8期北京时间：

作者：陈亮, 穆钰峰, 邵安良, 魏丽娜, 屈树新, 徐丽明

单位：1. 中国食品药品检定研究院, 北京 102629;2. 西南交通大学 材料科学与工程学院, 成都 611756

摘要：目的：对使用不同种属小鼠进行脾淋巴细胞增殖试验的适宜性和可比性进行研究。方法：分别获取BALB/c小鼠、野生型C57BL/6（简称C57）小鼠、Gal抗原缺失（C57背景，GGTA1基因被敲除）小鼠的脾淋巴细胞，在确定脾淋巴细胞数量与CCK8吸收度的线性范围后，设立阳性对照组（刀豆蛋白A，Con A）、不同稀释度的动物原材料匀浆液和脱细胞生物材料匀浆液等试验组，使用CCK8检测淋巴细胞增殖，流式细胞术测定淋巴细胞亚型百分比，以确定BALB/c小鼠、野生型C57小鼠和Gal抗原缺失小鼠在体外淋巴细胞增殖试验的适宜性和可比性。结果：C57小鼠脾淋巴细胞数量和CCK8的吸收度的线性范围要明显大于BALB/c小鼠，而BALB/c小鼠线性曲线的斜率明显大于C57小鼠。从CCK8检测的淋巴细胞增殖结果看，BALB/c小鼠与C57小鼠相比，2.5μg·mL-1的Con A对2种小鼠脾淋巴细胞增殖均出现明显刺激作用；牛跟腱（含低水平的Gal抗原）匀浆液对2种小鼠脾淋巴细胞增殖均显示刺激作用，并显示出量效关系；不同稀释度的胶原海绵（牛跟腱来源）匀浆液对2种小鼠脾淋巴细胞增殖均未显示刺激作用，表现了一致的结果，说明没有淋巴细胞促增殖作用。另外，来源于Gal抗原缺失小鼠与野生型C57小鼠的脾脏淋巴细胞对Con A、牛心包（含有高水平的Gal抗原）匀浆液均表现出强的增殖反应和相似的反应强度。流式细胞术检测结果显示牛心包匀浆原液组在Gal抗原缺失小鼠仅显示活化B细胞百分比与对照组相比有统计学显著性差异，而在野生型C57小鼠组其活化B细胞、活化T细胞、活化NK细胞、NKT细胞、CD4 T细胞百分比与对照组相比均有统计学显著性差异。结论：CCK8检测的各试验组淋巴细胞增殖率结果在C57小鼠与BALB/c小鼠、Gal抗原缺失小鼠与野生型C57小鼠间具有可比性，表明这些种属的小鼠均可用于体外淋巴细胞增殖试验。  

关键词：淋巴细胞增殖试验;BALB/c小鼠;C57BL/6小鼠;Gal抗原缺失小鼠;GGTA1基因敲除;动物源性生物材料,