基于实时细胞分析技术验证人诱导多能干细胞分化的心肌细胞毒性评价模型

来源：药物分析杂志2020年第1期北京时间：

作者：陈高建, 潘东升, 陈思蓉, 张颖丽, 李芊芊, 石茜茜, 王雪, 黄芝瑛, 王三龙

单位：1. 中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心, 药物非临床安全评价研究北京市重点实验室, 北京 100176;2. 中山大学药学院, 广州 510006

摘要：目的： 利用人诱导多能干细胞分化的心肌细胞（hiPSC-CMs）联合实时细胞分析（RTCA）技术，建立hiPSC-CMs体外心脏毒性评价模型，并选用阳性化合物进行验证。方法： 研究选用商业化来源的hiPSC-CMs，选用不同作用机制的心脏毒性药物：蒽环类抗癌药阿霉素（0.3、1、3 μmol·L-1）、K+通道阻滞剂多非利特（0.03、0.1、0.3 μmol·L-1）和E-4031（0.1、0.3、1 μmol·L-1）、Na+通道阻滞剂美西律（3、10、30 μmol·L-1）、多离子通道阻滞剂维拉帕米（0.1、0.3、1 μmol·L-1）和苄普地尔（0.3、1、3 μmol·L-1）、抗组胺药物特非那定（0.3、1、3 μmol·L-1）和西沙必利（3、10、30 μmol·L-1），分别给予hiPSC-CMs作用48 h，采用RTCA技术连续监测心肌细胞搏动的频率、振幅、细胞指数、搏动图谱等指标在给药前后的变化。结果： 阿霉素对心肌细胞的抑制作用呈现时效和量效依赖性特点；多非利特显著降低心肌细胞搏动幅度及频率；E-4031为1 μmol·L-1时显著降低心肌细胞搏动频率，缩短振幅，而0.1、0.3 μmol·L-1时则对心肌细胞无影响；30 μmol·L-1美西律作用2 h内心肌细胞搏动频率相对空白对照组降低了66.4%，振幅缩短了60.7%，并导致心肌细胞搏动周期延长；苄普地尔浓度低于1 μmol·L-1时对心肌细胞无影响，3 μmol·L-1苄普地尔作用2 h导致心肌细胞搏动间歇性停搏，并伴随细胞活力轻微下降；维拉帕米作用2 h内各剂量组心肌细胞搏动频率分别增强了12.2%、13.1%、52.3%，而振幅分别降低了20.0%、61.7%、67.6%。0.3 μmol·L-1以上浓度的维拉帕米导致心肌细胞搏动骤停（3/9）；特非那定浓度≥ 1 μmol·L-1时短时间内即导致心肌细胞间歇性搏动骤停；西沙必利短期作用2 h内显著降低心肌细胞搏动频率和幅度，10 μmol·L-1以上浓度的西沙必利持续抑制心肌细胞搏动频率。结论： hiPSC-CMs结合RTCA技术可用于预测药物的心脏毒性风险。

关键词：诱导多能干细胞分化的心肌细胞;心律失常;实时细胞分析（RTCA）;综合性离体致心律失常风险评估（CiPA）;频率;振幅,