重组CTLA4-Ig融合蛋白糖基化修饰对其功能影响的研究

来源：药物分析杂志2020年第8期北京时间：

作者：朱磊1于传飞2单改仙3王兰2

单位：1.火箭军特色医学中心2.中国食品药品检定研究院3.战略支援部队特色医学中心放疗科

摘要：目的:探讨糖基化修饰对细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4-抗体融合蛋白(CTLA4-Ig)功能的影响。方法:应用多种糖苷酶[N-糖苷酶F(N-glycosidase F)、内切糖苷酶F2(endoglycosidase F2)、唾液酸酶(neuraminidase)和O-糖苷酶(O-glycosidase)]对样品进行处理,获得处理后的样品。首先,应用ForteBio技术,分别测定酶切前后样品与白细胞分化抗原80(CD80)的亲和力;其次,选择报告基因法测定了CTLA4-Ig蛋白的抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(ADCC),以同时反映酶切样品与可结晶段(Fc)受体以及与靶抗原CD80的结合活性变化;最后,选择报告基因法测定酶切样品,阻断Duadi细胞结合并激活Jurkat细胞的能力,以评估其生物学活性。结果:通过ForteBio测定CTLA4-Ig融合蛋白与CD80的亲和力,发现酶切前后亲和力并无明显的变化;测定了不同酶切样品前后的ADCC活性,发现酶切前后的活性都保持在80%～120%的区间内,酶切前后的活性均未发生明显改变;测定了不同酶切样品前后的细胞活性,发现酶切前后的活性都保持在80%～120%的区间内,酶切前后的细胞活性均未发生明显改变。结论:通过多种分析手段研究,发现糖基化修饰对CTLA4-Ig的功能影响不显著。

关键词：细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4-抗体融合蛋白;融合蛋白;糖基化修饰;N-糖基化;O-糖基化;功能;,