基于mtDNAcytb基因兔睾丸鉴定方法的建立及检测试剂盒的研制

来源：药物分析杂志2020年第8期北京时间：

作者：王艳双1,2姜海瀛3李坦诚4艾金霞3高丽君3李明成3,2张丽华5孙丽媛3

单位：1.北华大学医学院2.北华大学吉林省中药DNA指纹检测技术科技创新中心3.北华大学医学技术学院4.长春市食品药品检验研究所5.吉林雷博科技有限公司 

摘要：目的:建立兔睾丸DNA指纹鉴定方法,研发出兔睾丸DNA检测试剂盒。方法:以穴兔线粒体DNA(mt DNA)细胞色素b(cyt b)基因作为靶基因,设计兔睾丸特异性引物,利用现代DNA指纹技术,研制兔睾丸DNA提取及检测试剂,并对试剂的特异性、重复性及稳定性进行考察;应用分子克隆及测序技术,克隆兔睾丸DNA检测的标准品;进而建立兔睾丸DNA指纹鉴定方法,制定质量标准,开发出兔睾丸DNA检测试剂盒。结果:自主研发的试剂提取的兔睾丸DNA结构完整性较好,DNA浓度与纯度均较高;59℃时引物的特异性最强;兔睾丸正品均在326 bp处出现1条特异性扩增条带,而阴性及空白对照均未出现扩增条带;克隆测序后的兔睾丸DNA序列与穴兔mt DNA特异指纹区段同源性100%。结论:本研究建立的兔睾丸DNA指纹鉴定方法特异、准确、可靠,研发的DNA检测试剂盒操作简便,结果稳定,适于普及推广使用。

关键词：兔睾丸;线粒体DNA细胞色素b基因;DNA指纹技术;PCR技术;分子克隆;基因测序;DNA检测试剂盒;,