HPLC法测定阿法骨化醇中有关物质*

来源：药物分析杂志2021年第1期北京时间：

作者：张媛媛, 张文轩, 吴松, 张洁, 冯靖, 王越, 杨庆云

单位：中国医学科学院 北京协和医学院药物研究所,北京 100050

摘要：目的:建立测定阿法骨化醇有关物质的HPLC 梯度洗脱法,并对其中关键的有关物质D 进行结构鉴定。方法:采用Waters XBridge C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以乙腈- 水- 氨水（80:20:0.1）为流动相A,乙腈为流动相B,流速1.0 mL·min-1,柱温为30 ℃,检测波长为265 nm;液质联用方法采用相同色谱柱和检测波长,以乙腈- 水- 氨水（80:20:0.1）为流动相,流速2.6 mL·min-1,柱温30 ℃;采用APCI 大气压化学离子源,正离子模式扫描,离子源电压为6.0 kV,毛细管温度为275 ℃,毛细管电压为35 V,Tube lens 为125 V,雾化器温度为450 ℃。结果:阿法骨化醇与6 种有关物质峰之间的分离良好;阿法骨化醇及各有关物质质量浓度在0.1~2.0 μg·mL-1 范围内,与相应的峰面积呈良好的线性关系（R2>0.999）;各有关物质的定量下限低于5 ng,检测下限低于1.5 ng。采用HPLC-MS/MS 方法,有关物质D的结构鉴定为（1α,3β,5Z,7E）-9,10- 开环胆甾-5,7,10（19）- 三烯-1,3- 二醇。结论:此HPLC 梯度洗脱法专属性强,准确度高,优于现行标准方法,适用于阿法骨化醇产品的有关物质检查。鉴定了关键杂质D 的结构,并将其订入质量标准,为现有药品标准的补充。

关键词：阿法骨化醇,维生素D 类化合物,脂溶性甾醇,有关物质,高效液相色谱法,高效液相色谱-串联质谱法,结构鉴定,

基金资助：中国医学科学院医学与健康科技创新工程（2016-12M-3-010）;重大新药创制科技重大专项（2017ZX09101001-005-002）