基于L5178Y 细胞的Pig-a基因突变试验方法学研究*

来源：药物分析杂志2021年第1期北京时间：

作者：王亚楠, 王雪, 文海若

单位：中国食品药品检定研究院 国家药物安全评价监测中心,药物非临床安全性评价研究北京市重点实验室,北京 100176

摘要：目的:采用不同作用机制化合物研究基于L5178Y 细胞体外Pig-a 基因突变试验方法。方法:使用不同浓度范围的马兜铃酸I（aristolochic acid I,AAI）、N- 亚硝基二乙胺（N-nitrosodiethylamine,NDEA）、甲磺酸甲酯（methyl methanesulfonate,MMS）、环磷酰胺（cyclophosphamide,CP）、秋水仙素（colchicine,COL）、丝裂霉素C（mitomycin C,MMC）、糖精、乙烯利、苯并芘[benzoa pyrene,B（a）P]和4- 硝基喹啉-N- 氧化物（4-nitroquinoline N-oxide,4-NQO）共10 种化合物,分别与L5178Y 细胞作用一段时间后表达8 d,细胞经APC 抗CD45 与PE 抗CD90.2 抗体孵育后使用流式细胞术收集100 万个细胞并识别表型为CD90-/CD45+ 突变细胞,并计算突变率。结果:致突变剂AAI、NDEA、MMS、 MMC、B（a）P、4-NQO 分别在无或有代谢活化条件下导致L5178Y 细胞Pig-a 基因突变率显著性升高,而需代谢活化的致突变剂CP、整倍体诱变剂COL、非遗传毒性致癌物乙烯利和糖精的试验结果为阴性。结论:基于L5178Y 细胞的体外Pig-a 基因突变检测方法可在无及有代谢活化条件下有效检出致突变剂,特异性和可靠性较高,在药物基因突变风险评价及机制研究领域具有不可或缺的价值。

关键词：遗传毒性,Pig-a基因突变,L5178Y细胞,体外试验,致突变剂,方法研究,

基金资助：十三五国家重大新药创制科技重大专项（2018ZX09201017-001）