ELISA 法测定食蟹猴血清中抗PD-1 单克隆抗体浓度

来源：药物分析杂志2021年第4期北京时间：

作者：高妍, 徐楠楠, 汪宁, 宋兢, 张翠宁, 孙云霞, 李开通

单位：1.北京昭衍新药研究中心股份有限公司（生物制品安全性评价北京市重点实验室）,北京 100176;2.百济神州（北京）生物科技有限公司,北京 102206

摘要：目的：建立灵敏度高、特异性好且快速的ELISA 方法,用以测定食蟹猴血清中的抗PD-1 单克隆抗体（代号BGB-A317）浓度。方法：建立间接ELISA 方法对BGB-A317 进行定量分析。测定原理：包被重组人PD-1,加入稀释的血清样品,之后加入稀释好的辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG（酶标抗体）,再加入TMB 底物进行显色和2 mol·L-1 硫酸作为终止液,在酶标仪上用双波长读取D450/630nm 值,以标准曲线样品D450/630nm 为纵坐标,以样品浓度为横坐标,进行非线性五参回归运算,得到标准曲线方程,将待测样品D450/630nm 代入方程即可得到待测样品浓度。结果：建立并验证了该ELISA 方法,定量范围为3~180 ng·mL-1。精密度（板内和板间）均在±15% 之内,准确度介于75%~125%;食蟹猴空白血清、样品稀释液和干扰单克隆抗体对BGB-A317 在食蟹猴血清中的浓度测定无影响;稀释线性样品的精密度小于20%,准确度介于80%~120%;平行性样品的精密度为小于20%;BGB-A317 在食蟹猴血清中室温放置4 h、-70 ℃以下放置70 d 及反复冻融3 次后均保持稳定,样品准确度均介于80%~120%。结论：方法学验证表明该间接ELISA 方法具有良好的灵敏度、准确度、特异性和可重复性,可用于定量分析食蟹猴血清中BGB-A317的浓度。

关键词：抗PD-1 单克隆抗体,定量分析,抗原捕获间接酶联免疫吸附法,方法验证,