德谷胰岛素酰化修饰产物的研究与检测方法建立

来源：药物分析杂志2021年第4期北京时间：

作者：王芳, 牛罡, 郑伟, 徐明波, 郑枫

单位：1.中国药科大学药学院,南京210009;2.北京双鹭药业股份有限公司,北京 100049

摘要：目的：对特定反应条件下的酰化修饰产物进行研究,利用RP-HPLC 建立德谷胰岛素（IDeg）修饰产物的质控方法。方法：对德谷胰岛素酰化修饰产物进行质谱相对分子质量分析,确定重点研究的修饰副产物。制备相应修饰副产物对照品,利用Waters Acquity H-Class/Xevo G2-XS QTof 系统对各对照品进行结构确认（质谱相对分子质量、肽图覆盖率）。建立德谷胰岛素修饰产物质控方法,采用Welch Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm,5 μm,300 Å）色谱柱,以0.1% 三氟乙酸溶液-0.1% 三氟乙酸乙腈溶液为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长214 nm,柱温35 ℃,进样量20 μL。结果：确定了3种重点研究的修饰副产物IDeg-A1、IDeg-B1、IDeg-A1B29。IDeg、IDeg-A1、IDeg-B1、IDeg-A1B29 相对分子质量均与理论值一致;覆盖率均为100% 且修饰位点正确。对修饰未完全样品、修饰完全样品进行检测,修饰未完全样品、修饰完全样品含量分别为5.45、7.13 mg·mL-1,IDeg 纯度分别为46.651%、63.325%。对建立的德谷胰岛素修饰产物质控方法进行方法学验证,IDeg 质量浓度在0.20~0.75 mg·mL-1 范围内与峰面积线性关系良好（R2=1.000 0,n=5）,回收率范围为98.3%~100.5%（n=9）;有关物质IDeg-A1、IDeg-B1、IDeg-A1B29、D30的检测下限分别为1.50、1.83、1.40、4.00 μg·mL-1;定量下限分别为3.00、3.65、4.20、5.00 μg·mL-1。结论：德谷胰岛素酰化修饰产物中的修饰副产物主要包括IDeg-A1、IDeg-B1、IDeg-A1B29。建立了IDeg修饰产物的质控方法,该方法准确度、精密度、专属性、耐用性良好,可用于IDeg的含量测定及纯度分析;为进行C16-谷氨酸-NHS 修饰位点的专一性研究、优化修饰条件、制定质量标准提供支持。

关键词：德谷胰岛素,脂肪酸修饰,修饰位点,修饰副产物,组成成分,反相高效液相色谱,质量控制,纯度,