Online SPE-LC-MS/MS 法快速同时分析人血浆中5种CYP450 酶探针药及6种代谢物*

来源：药物分析杂志2021年第4期北京时间：

作者：张颖, 李军梅, 苗兰, 孙明谦, 林力, 刘建勋, 徐立

单位：中国中医科学院 西苑医院基础医学研究所,中药药理北京市重点实验室,北京 100091

摘要：目的：建立人血浆中主要CYP450 酶探针药及其特异代谢物的快速、准确定量分析方法,以开展药物-药物相互作用（DDI）的临床评价。方法：针对5种主要CYP450 亚型,选择咖啡因（CYP1A2）、氯沙坦（CYP2C19）、奥美拉唑（CYP2C9）、右美沙芬（CYP2D6,CYP3A4）和咪哒唑仑（CYP3A4）组成鸡尾酒探针药组合。建立一种online SPE-LC-MS/MS 方法对给予探针药后的人血浆样本进行分析。血浆样品通过葡萄糖醛酸酶水解进行前处理,采用Spark HySphere-C18HD（10 mm×2 mm,7 μm）为固相萃取柱,Shiseido MGⅢ（2.0 mm×100 mm,5 μm）为分析柱,柱温40 ℃。以含0.01% 甲酸的甲醇-乙腈（1∶1）-水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.35 mL·min-1。在质谱ESI 源、正离子扫描方式下检测5种探针药及相应的6种代谢产物的母离子-子离子对。结果：所建立的分析方法可在5 min 完成11种待测成分的分析。对方法学的验证表明所建立的方法对血浆样品分析具有专属性,定量范围内线性良好,无基质效应影响。中和高浓度下待测成分的批内和批间样品的RSD 为2.1%~14.2%,LLOQ 浓度下为2.1%~15.4%,准确度在86.4%~107.2% 范围内。样品在室温、长期冻存、反复冻融及样品架放置条件下稳定性良好。采用该方法对服用鸡尾酒探针药后的人血浆样本进行了分析,检测出的5种探针药及6种代谢物浓度均在定量区间内,其中右美沙芬代谢物3-甲氧基吗啡喃浓度最低,均低于2 ng·mL-1。结论：所建立的Online SPE-LCMS/MS 分析方法快速、灵敏、准确,可应用于采用鸡尾酒探针的临床DDI 研究和代谢酶活性评估。

关键词：细胞色素P450 酶（CYP450 酶）,鸡尾酒探针,在线固相萃取,液质联用,药物-药物相互作用,

基金资助：国家自然科学基金（81873179）;国家重大新药创制科技重大专项（2018ZX09737-009）;北京市科技计划项目（Z171100001717004）