白头翁皂苷 B4 对小鼠肝药酶 CYP1A2 表达及酶活性的影响*

来源：药物分析杂志2021年第6期北京时间：

作者：龚琴, 王木兰, 李军茂, 黄文平, 冯育林, 付爱东, 杨世林, 李俊

单位：1.江西中医药大学,南昌 330006; 2.创新药物与高效节能降耗制药设备国家重点实验室, 南昌 330006; 3.江西沐恩堂生物科技有限公司,南昌 330006

摘要：目的: 观察白头翁皂苷 B4 体内、体外对小鼠肝药酶 CYP1A2 酶活性及表达的影响,为白头翁 B4 的 药物相互作用提供实验依据。方法: 采用 UHPLC XB-C18 色谱柱（2.1 mm×50 mm,1.8 μm）分离样品, 以 0.1% 甲酸水和乙腈为流动相,流速 0.3 mL·min-1,采用电喷雾离子源（ESI）正离子模式,多反应离子（MRM）扫描方式,定量离子对为 m/z 180.1~109.9,建立检测非那西丁的 UPLC-MS/MS 检测方法。制备正常 小鼠肝粗酶液并建立体外酶孵育体系,将粗酶液与探针非那西丁（4 μg·mL-1）、B4 溶液（50 μg·mL-1）进行孵 育,UPLC-MS/MS 检测孵育 5、15、30、60、120 min 体系中非那西丁含量,绘制时间与含量的线性方程,对方程 中 a 值进行统计分析以反映非那西丁的代谢速率。小鼠静脉注射给药 3 d 后腹腔注射探针非那西丁（2 mg· kg-1）,UPLC-MS/MS 测定注射后 5、15、30、60 min 小鼠血浆中非那西丁含量,qPCR 和 WB 分别检测肝脏中 mRNA、蛋白表达。结果: 非那西丁浓度在 4~2 000 ng·mL-1 范围内与峰面积线性关系良好（r2=0.993 6）,检 测下限为 0.1 ng·mL-1（S/N ≥ 3）,定量下限为 0.2 ng·mL-1（S/N ≥ 10）,日内精密度 RSD 小于 5%,日间精 密度 RSD 小于 10%,回收率为 88.5%~92.9%。B4 体外对非那西丁的代谢速率无明显影响（P>0.05）;B4 可 明显加快小鼠血浆中非那西丁的代谢速率（P<0.01）,且一定程度上调小鼠肝组织中 CYP1A2 mRNA 和蛋白 表达。结论: 白头翁皂苷 B4 体外对 CYP1A2 酶活性无明显影响,体内对该酶活性有缓和的促进作用,其促进作用与上调该酶的基因转录和蛋白表达有关。

关键词：白头翁皂苷 B4,UPLC-MS/MS,小鼠,非那西丁,CYP1A2,探针,体内,体外,

基金资助：江西省中药学一流学科专项基金项目（JXSYLXK-ZHYAO012）;国家重点研发计划资助（2019YFC1712300）