ELISA 法定量测定食蟹猴血清中的抗CTLA-4 单克隆抗体

来源：药物分析杂志2021年第7期北京时间：

作者：李青莲, 王斌, 徐楠楠, 汪宁, 孙云霞, 李开通

单位：1.北京昭衍新药研究中心股份有限公司 生物制品安全性评价北京市重点实验室,北京 100176; 2.华兰基因工程有限公司,新乡 453000

摘要：目的: 建立酶联免疫吸附法（ELISA 法）用于测定食蟹猴血清中的抗CTLA-4 单克隆抗体（伊匹单抗,YERVOY®）的浓度。方法: 建立间接ELISA 方法对待测抗体药进行浓度测定,将Human CTLA-4 蛋白包被于酶标板中,封闭后加入稀释后样品,采用HRP 标记的羊抗人IgG 作为酶标抗体,用TMB 底物进行显色并用2 mol·L-1 硫酸终止,在酶标仪上用双波长读取D450/630 nm 值。最后以标准曲线样品D450/630 nm 为纵坐标（Y）,以样品浓度为横坐标（X）,进行非线性五参回归运算,得到标准曲线方程,将待测样品D450/630 nm 带入方程即可得到待测样品浓度。结果: 在优化的条件下,本方法的定量范围为0.625~30.000 μg·mL-1,定量下限为0.625 μg·mL-1。精密度（批内和批间）均在±15% 之内,准确度介于75%~125%。方法特异性、选择性、稀释线性均满足可接受标准,准确度介于80%~120%。同时抗CTLA-4 单克隆抗体在食蟹猴血清中经验证具有良好的室温稳定性、反复冻融稳定性及长期稳定性,样品准确度均介于80%~120%。结论: 本研究建立的方法满足《中华人民共和国药典》2020 年版中生物样品定量分析方法验证指导原则的要求,可用于定量分析食蟹猴血清中抗CTLA-4 单克隆抗体（YERVOY®）的浓度。

关键词：抗CTLA-4 单克隆抗体（YERVOY®）,酶联免疫吸附法,定量测定,方法验证指导原则,