高效液相色谱和液质联用技术用于人干扰素 α2b 中甲硫氨酸氧化的研究

来源：药物分析杂志2021年第7期北京时间：

作者：尹红锐, 张颖, 徐明明, 陈钢, 邵泓

单位：上海市食品药品检验研究院,国家药监局治疗类单抗质量控制重点实验室,上海 201203

摘要：目的: 采用高效液相色谱（HPLC）、超高效液相色谱- 四极杆串联飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF MS） 技术对人干扰素α2b 中甲硫氨酸的氧化情况进行研究。方法: HPLC 法采用Jupiter 5U C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm,300 Å）,流动相A 为乙腈- 水- 三氟乙酸（300∶700∶2）,流动相B 为乙腈- 水- 三氟乙酸（800∶200∶2）,梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长210 nm。UPLC-Q-TOF MS 法采用BEH300 C4 色谱柱（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）和BEH300 C18 色谱柱（2.1 mm×150 mm,1.7 μm）,流动相A 为0.1% 甲酸水溶液,流动相B 为0.1% 甲酸乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.2 mL·min-1;采用Q-TOF MS 的电喷雾正离子模式,相对分子质量测定时采用MS 模式进行扫描,氨基酸序列测定时采用MSE 模式进行扫描。结果: 对2 家企业6 批人干扰素原液进行了测定,2 家企业产品中甲硫氨酸氧化比例差别较大,其中一家企业氧化比例较高,第16 位的甲硫氨酸氧化比例达到了99% 以上。结论: 在人干扰素α2b 相关制品中增加氧化杂质的控制是有必要的。本研究也为企业进行相关研究提供了思路。

关键词：人干扰素α2b,细胞因子,甲硫氨酸,氧化,高效液相色谱,超高效液相色谱- 四极杆串联飞行时间质谱法,