制霉素中未知成分的结构鉴定及UHPLC法含量测定*

来源：药物分析杂志2021年第8期北京时间：

作者：孙胜男, 冷霄云, 李怡然, 孙忠浩, 李晓茜, 孟祥燕, 解云英, 山广志

单位：1.中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所, 北京 100050; 2.浙江震元制药有限公司浙江震元制药研究院, 绍兴 312071

摘要：目的:鉴定制霉素中未知成分（RT6）的结构, 并建立该成分的UHPLC 含量测定方法。方法:从原料药中分离纯化未知成分, 利用核磁共振波谱和高分辨质谱对未知成分（RT6）进行结构鉴定和解析。采用Thermo Hypersil GOLD C18（100 mm×2.1 mm, 1.9 μm）色谱柱, 甲醇-乙腈-28 mmol·L-1 醋酸铵溶液（0.8%乙酸）为流动相, 梯度洗脱, 流速0.2 mL·min-1, 柱温30 ℃, 检测波长305 nm。结果:经NMR 和HRMS 鉴定, 制霉素中未知成分为白诺氏菌素。在建立的色谱条件下, 该成分与其他成分分离良好, 质量浓度在1.70~6.80 μg·mL-1（r=0.999 9）范围内与峰面积呈良好线性关系, 低、中、高3 个水平下平均回收率分别为103.6%、99.4% 和100.1%, RSD 分别为0.33%、1.6% 和0.90%。3 批供成品中白诺氏菌素的含量检测结果分别为3.97%、3.41%、3.72%。结论:制霉素原料中存在的未知成分为白诺氏菌素。经方法学验证, 建立的UHPLC 方法可用于制霉素原料药中白诺氏菌素的测定与控制。

关键词：制霉素,白诺氏菌素,结构鉴定,液相色谱-质谱,核磁共振,超高效液相色谱,含量测定,

基金资助：^*十三五新药创制重大专项（2017ZX09101001）