实时荧光定量PCR共检测人疱疹病毒6型和7型核酸方法的建立和应用

来源：药物分析杂志2021年第9期北京时间：

作者：张峰, 高丽英, 宋雪, 袁蓉蓉, 吴雪玲, 樊金萍, 孟淑芳

单位：1.中国食品药品检定研究院,北京 102629; 2.山东省广饶县人民医院,东营 257300

摘要：目的:建立同时检测样品中人疱疹病毒6 型(human herpesvirus 6,HHV-6)和人疱疹病毒7 型(human herpesvirus 7,HHV-7)核酸的单一实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法。方法:分析HHV-6、HHV-7 型代表株基因组核酸序列,选取同源序列设计单一探针和分别针对HHV-6 和HHV-7 的扩增引物,通过试验比较和分析,确定使用混合引物对检测没有影响,对扩增温度进行优化后建立Real-time PCR 方法。对所建立方法的特异性、检测下限(limit of detection,LOD)、定量下限(limit of quantitation,LOQ)、线性、准确性进行验证,使用该方法对临床样品和生物制品生产用细胞基质进行检测,并与套式PCR 的检测结果进行比较。结果:经比较, HHV-6 和HHV-7 扩增引物混合对检测性能无影响,可分别或同时检测样品中存在的HHV-6/HHV-7 核酸。特异性验证中,293 细胞及PRV、VSV、VZV、EB1、EB2、EB3、CMV1/2/3、HSVI、HSVII 基因组DNA 样品对检测无干扰。方法的LOD 和LOQ 分别为：1×102 copies 和1×103 copies,线性范围为1×103~1×107 copies。使用建立的Real-time PCR 方法和套式PCR 方法分别对86 份临床血浆样品和15 种生产用细胞基质样品进行检测,两种方法在临床样品中分别检出8 份和4 份阳性,χ2分析表明,real-time PCR 方法检出率显著高于套式PCR 方法,15 种细胞基质样品无阳性。结论:所建立的Real-time PCR 方法可在单个扩增反应中同时检测HHV-6 和HHV-7 核酸,检测灵敏度高于传统的套式PCR 方法,可用于临床样品和生产用细胞基质样品的检测。

关键词：人疱疹病毒6型,人疱疹病毒7型,实时荧光定量PCR,细胞基质,检测,