注射剂科氏葡萄球菌污染的鉴定和同源性分析方法研究*

来源：药物分析杂志2021年第10期北京时间：

作者：孙雪奇, 肖剑, 秦力, 陈婕, 柴海毅, 刘程智, 杨小蓉, 毛新武

单位：1.广州市食品检验所,广州 511400; 2.四川省食品药品检验检测院,成都 611731; 3.上海诺狄生物科技有限公司, 上海 201162; 4.杭州微数生物科技有限公司,杭州 311231; 5.四川省疾病预防控制中心,成都 610041

摘要：目的:采用多种常用微生物鉴定方法和同源性分析方法,对某制药企业注射剂无菌检查试验中分离的微生物污染菌A1进行来源分析,为药品生产企业完善微生物监控体系,实现生产和检验过程的微生物控制提供技术参考。方法:使用VITEK 2微生物生化鉴定仪对A1和本次污染调查采集的78株菌进行初步鉴定,选择与A1同属的菌,分别采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)、基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、16S rRNA基因序列分析、核糖体分型(Ribotyping)、全基因组测序(WGS)等方法进行鉴定和同源性分析,同源性分析结果用PFGE进行了验证。结果:除MALDI-TOF MS法的部分鉴定结果外,几种方法的微生物鉴定结果完全相同;上述方法的同源性分析结果均为A1溯源自无菌检验使用的无菌隔离器内部仪器表面采集菌株A2(16S rRNA基因序列分析本次仅溯源至亚种),该结果得到了PFGE证实;不同方法在种的集群之间的亲缘关系划分有所不同。结论:微生物污染溯源的流程一般包括以下3步:首先采用生化鉴定法初步确定污染菌的种;其次从污染调查采集菌株和环境菌库中选择与污染菌同种的微生物;然后,使用16S rRNA基因序列分析、核糖体分型、全基因组测序等方法进行微生物鉴定和同源性分析。采用16S rRNA基因序列分析时,必须进行多相鉴定以便准确溯源,才能有效实施纠正与预防措施。

关键词：微生物污染,鉴定,同源性分析,葡萄球菌,傅里叶变换红外光谱(FTIR),基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS),16S rRNA基因序列分析,核糖体分型,全基因组测序(WGS),脉冲场凝胶电泳(PFGE),微生物污染溯源流程,

基金资助：^*四川省科技基础条件平台项目(2017TJPT0044);成都市科技惠民技术研发项目(2016-HM01-00087-SF);广州市科学研究计划(201904010253)