门冬酰胺酶效价和纯度测定方法研究*

来源：药物分析杂志2022年第1期北京时间：

作者：王悦, 陈欣桐, 李京, 范慧红

单位：1.中国食品药品检定研究院, 北京102629;2.化学药品质量研究与评价重点实验室, 北京 102629

摘要：目的: 建立和优化鉴别、纯度和效价测定等质量控制方法,提高和完善大肠埃希菌(Escherichia coli)、欧文氏菌(Erwinia carotovora)来源的门冬酰胺酶的质量标准。方法:考察了Xbridge protein BEH SEC(300 mm×7.8 mm,3.5 μm,200Å)和TSK G3000swxl(300 mm×7.8 mm,5 μm)2款色谱柱在纯度测定方法中的分离情况,并对流动相进行了优化;考察了效价测定方法中反应的量效关系和线性范围,探讨了斜率比模型和标准曲线法的效价计算方式。结果:以0.1 mol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 6.7)为流动相,采用Xbridge protein BEH SEC色谱柱进行分离,主峰前后各杂质峰分离度有了较大改善。2种菌种来源的门冬酰胺酶效价反应剂量在2~30 U·mL-1范围内均呈直线反应,r均大于0.995,标准曲线测定方法更为简单、准确,样品采用高低双剂量可以有效消除实验误差,双剂量测定偏差可小于±2.0%。结论:与绝对法相比,相对法在效价测定的准确度和重现性方面都有较大提高;优化后的纯度测定方法提高了杂质峰的分离度,可以更好地避免因积分方式带来的结果误差。

关键词：门冬酰胺酶,大肠埃希菌,欧文氏菌,纯度,效价测定,鉴别,质量标准,

基金资助：*北京市自然科学基金(7194337)