基于报告基因的重组人促卵泡激素Fc融合蛋白生物学活性测定方法研究*

来源：药物分析杂志2022年第1期北京时间：

作者：孙爽, 王绿音, 李晶, 吕萍, 徐可铮, 梁誉龄, 张慧, 李湛军, 梁成罡

单位：1.沈阳药科大学, 沈阳 110016;2.中国食品药品检定研究院 激素室 国家卫生健康委员会生物技术产品 检定方法及其标准化重点实验室, 北京 102629

摘要：目的: 利用转基因细胞法建立重组人促卵泡激素Fc融合蛋白(rhFSH-Fc)生物学活性检测方法。方法:利用CHO-K1-FSHR-CRE-Luc转基因细胞,按一定细胞密度种板,培养16~20 h后吸弃培养基,将rhFSH-Fc倍比稀释加入细胞板,药物作用一段时间后加入荧光素酶检测试剂,通过荧光素酶检测系统对rhFSH-Fc进行生物性活性检测,并对各试验条件参数优化及进行方法学验证。结果:rhFSH-Fc在该方法中存在量效关系且符合四参数曲线方程,R2大于0.99;方法优化后确定细胞种板密度为5×105 个·mL-1,rhFSH-Fc稀释起始浓度为750 ng·mL-1,1∶5倍的稀释倍数,诱导时间为4 h,样品稀释液为DMEM/F12K+10%FBS。该方法具有良好的专属性,9次独立日间、日内精密度检测RSD均小于5%,5个不同稀释组回收率样本经6次测定,相对效价分别为(51±2.00)%、(78±2.05)%、(94±2.23)%、(124±3.46)%、(141±4.45)%;对应回收率平均值分别为(101±3.94)%、(104±3.00)%、(94±2.24)%、(99±2.68)%、(94±3.03)%,RSD均小于4%。结论:本研究利用转基因细胞成功建立rhFSH-Fc生物学活性测定方法,该方法操作简便,重复性好,准确性高,可用于rhFSH-Fc产品的常规检测。

关键词：重组人促卵泡激素Fc融合蛋白,长效重组蛋白药物,报告基因法,环磷酸腺苷,CHO-K1-FSHR-CRE-Luc转基因细胞,生物学活性测定,方法学验证,信号通路,

基金资助：*国家科技重大专项课题资助项目(2018ZX09101001-003-004)