时间分辨荧光免疫分析法测定人胰岛素生物学活性*

来源：药物分析杂志2022年第1期北京时间：

作者：杨艳枫, 王绿音, 梁誉龄, 李湛军, 张慧, 李晶, 高向东, 梁成罡

单位：1.中国药科大学, 南京 211198;2.中国食品药品检定研究院 激素室 国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其 标准化重点实验室, 北京 102629

摘要：目的:利用时间分辨荧光免疫分析系统建立人胰岛素基于转基因细胞的生物学活性检测方法。方法:以CHO-INSRB1284转基因细胞2.5×105个·mL-1作为靶细胞,以400 pmol·mL-1作为初始浓度对人胰岛素进行3倍系列稀释,随后药物与靶细胞作用20 min,通过时间分辨荧光免疫分析系统,进行生物学活性检测,对该方法进行关键参数的优化,并依据2020年版《中华人民共和国药典》四部通则9401和ICH指导原则Q2(R1)、Q6B进行验证。结果:人胰岛素在本方法中存在良好的量效关系,符合四参数方程:y=(A-D)/[1+(x/C)B]+D。本方法专属性强,5个效价水平(64%、80%、100%、125%及156%)的相对生物学活性(n=8)的几何平均值分别为(55.8±2.06)%、(82.1±5.52)%、(94.4±5.46)%、(121.4±5.94)%、(154.4±8.37)%,相对偏倚及其90%置信区间分别为 -12.8%(-16.3%, -9.9%)、2.6%(-4.4%, 9.5%)、-5.6%(-11.2%, -0.3%)、-2.9%(-7.7%, -1.8%)、-1.0%(-7.1%,3.9%),相对偏倚及置信区间的绝对值均不超过20%,表明该方法相对准确度良好。5个效价水平的几何变异系数(GCV)及其置信区间的上限均小于20%,结果证明此方法精密性较好。线性范围为64%～156%,斜率为1.031,R2大于0.98。结论:本研究利用时间分辨荧光免疫分析系统成功建立了人胰岛素基于转基因细胞的生物学活性检测方法,该方法可用于人胰岛素体外药效评价和质量控制。

关键词：生物学活性,人胰岛素,时间分辨荧光,转基因细胞,方法学验证,受体磷酸化,

基金资助：*国家科技重大专项课题资助项目(2018ZX09101001-003-004)