基于Cocktail探针药物法研究木犀草素在大鼠体内对CYP450酶活性影响*

来源：药物分析杂志2022年第2期北京时间：

作者：宋可心, 衣洁, 高琳, 任纪平, 李倩

单位：1.哈尔滨医科大学药学院药物分析与分析化学教研室,哈尔滨 150000;2.哈尔滨医科大学药学院药剂学教研室,哈尔滨 150000

摘要：目的: 应用Cocktail探针药物法评价木犀草素对大鼠体内CYP450酶亚型活性的影响。方法: 首先将大鼠随机分为空白组和木犀草素组,2组分别灌胃羧甲基纤维素钠(2.0 mL·kg-1)和木犀草素(30.0 mg·kg-1)1 d,并于第7 d腹腔注射混合探针药物溶液(含10.0 mg·kg-1的非那西汀和睾酮,2.5 mg·kg-1的甲苯磺丁脲)。之后在不同时间点对大鼠进行眼眶取血,血浆样本经异丙醇沉淀后进入液质测定。UHPLC-MS/MS色谱部分采用ZORBAX SB-C18(2.1 mm×30 mm,3.5 μm)色谱柱进行分离,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱;质谱部分使用电喷雾离子源(ESI),分别在正、负离子条件下采用MRM模式下进行监测,将所采集数据输入DAS软件计算药动学参数。另外,采用Western blot法观察木犀草素对CYP450蛋白表达的影响,对体内结果做进一步验证。结果: 非那西汀、睾酮、甲苯磺丁脲分别在2.0~2 000.0、0.3~300.0及1.7~1 700.0 ng·mL-1浓度范围内线性关系良好,定量限分别为2.0、0.3、1.7 ng·mL-1。所建立UHPLC-MS/MS法专属性良好,各待测药物准确度在96.9%~108.0%范围内,日间和日内精密度RSD均小于8.9%,提取回收率、基质效应以及稳定性考察项目均符合测定要求。药动学结果显示,与空白组相比,木犀草素组非那西汀AUC值明显降低,甲苯磺丁脲和睾酮AUC值均呈现升高趋势,但睾酮变化非常轻微。Western blot结果表明,木犀草素组大鼠CYP1A2蛋白表达增加,而CYP2C9和CYP3A4蛋白表达减少。结论: 根据FDA CYP450酶诱导剂和抑制剂标准,木犀草素可作为CYP1A2的中度诱导剂,CYP2C9的弱抑制剂,但对CYP3A4无显著影响。

关键词：木犀草素,液质联用法,药代动力学,探针药物,CYP450酶,免疫印迹法,

基金资助：^*国家自然科学基金项目(81970055)