血清外泌体的提取方法与鉴定*

来源：药物分析杂志2022年第8期北京时间：

作者：李雪洁, 付洁, 冀元凯, 宋海峰

单位：1.安徽医科大学基础医学院,合肥 230000; 2.中国人民解放军军事科学院军事医学研究院生命组学研究所,蛋白质药物国家工程研究中心,北京 102206

摘要：目的:建立阴选纯化富集(NSPE)法,从血清中高效、快速提取外泌体,并对外泌体进行鉴定。方法:利用低密度脂蛋白受体与低密度脂蛋白(LDL)结合的原理,去除人血清中大量LDL干扰,再通过外泌体表面磷脂分子的磷酸盐基团与二氧化锆(ZrO2)双配位结合的原理富集外泌体。使用纳米流式细胞仪、透射电子显微镜来检测外泌体的粒径分布、颗粒浓度和形态特征,蛋白免疫印迹法检测外泌体表面标志性蛋白。使用基因本体论数据库和京都基因与基因组百科全书数据库对外泌体内部的microRNAs (miRNAs)进行基因通路分析。结果:该方法可在60 min从血清中有效提取外泌体。外泌体颗粒浓度为(2.94±0.3)×1010颗粒·mL-1,粒径大小为(88.07±2.94) nm,并呈现标志性蛋白TSG101+、CD9+。外泌体内部miRNAs与免疫、代谢过程等相关。结论:建立的NSPE法可从血清中高效、快速地提取外泌体,用于健康监测和医学检验。

关键词：外泌体,医学检验,ZrO2,miRNAs,阴选纯化富集法,

基金资助：*国家自然科学基金面上项目(81272701/H1617)