基于DNA条形码和HRM技术建立紫草药材的RFLP-HRM鉴别方法*

来源：药物分析杂志2022年第8期北京时间：

作者：刘杰, 房文亮, 唐哲, 连超杰, 戴胜云, 过立农, 郑健, 乔菲, 马双成, 李昀铮

单位：1.中国食品药品检定研究院,北京 102629; 2.中国药科大学,南京 210009; 3.松原市食品药品检验所,松原 138000

摘要：目的:基于DNA条形码技术和高分辨率熔解曲线(HRM)技术鉴别紫草市场样品的真伪并建立紫草药材的RFLP-HRM鉴别方法。方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对紫草药材的ITS2序列进行扩增;利用MEGA 6.06软件对紫草药材的ITS2序列进行NJ树聚类分析和遗传距离分析;对市场中紫草非药典品进行基原确证;针对紫草药材的ITS2序列利用Primer Premier 5软件进行引物设计;对经设计、合成的引物通过HRM实验进行筛选;建立紫草药材的RFLP-HRM鉴定方法。结果:通过对紫草药材的ITS2序列进行NJ树聚类分析和遗传距离分析,可以有效区分新疆紫草、疏花软紫草、黄花软紫草及市场上非药典来源的紫草药材(紫草非药典品);经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出4对引物进行合成;通过HRM实验筛选出引物Zcf-1为最佳实验引物;确立了有效鉴别紫草市场药材的RFLP-HRM方法。结论:通过DNA条形码和HRM技术均能有效鉴别紫草市场药材真伪,且结果一致,起到互相验证的作用,建立了紫草市场药材的RFLP-HRM鉴定方法,为紫草及其他中药民族药品种的快速鉴定技术提供了可以参考的依据。

关键词：紫草,聚合酶链式反应(PCR),内部转录间隔区2(ITS2),DNA条形码,高分辨率熔解曲线(HRM),

基金资助：*中国食品药品检定研究院学科带头人培养基金(2021X4)