基于响应面法优化紫草药材的基因组DNA提取条件*

来源：药物分析杂志2022年第8期北京时间：

作者：刘杰, 房文亮, 唐哲, 连超杰, 戴胜云, 过立农, 郑健, 乔菲, 马双成, 李昀铮

单位：1.中国食品药品检定研究院,北京 102629; 2.中国药科大学,南京 210009; 3.松原市食品药品检验所,松原 138000

摘要：目的:基于响应面法对紫草药材基因组DNA的提取条件进行优化。方法:考察植物基因组DNA提取试剂盒中不同操作步骤反应时间对紫草药材基因组DNA提取效率与质量的影响;基于响应面法对紫草药材基因组DNA提取过程中取样量、乙醇处理、裂解时间3个条件进行优化;对优化条件进行验证;通过调整PCR扩增体系中的引物浓度,而对紫草药材基因组DNA的PCR扩增体系进行优化。结果:通过考察植物基因组DNA提取试剂盒中不同操作步骤反应时间对紫草药材基因组DNA提取效率与质量的影响,发现不同反应时间的影响不明显;基于响应面法,确定紫草药材基因组DNA的最佳提取条件为取样量100 mg、裂解过夜(12~15 h)、以100%乙醇浸泡样品24 h进行前处理;通过对紫草市场样品100批进行验证,PCR扩增成功率为89%;确定紫草药材基因组DNA的PCR体系中最佳引物浓度为0.10 μmol·L-1,当所得基因组DNA仍不能正常扩增时,可将DNA稀释10倍。结论:通过对紫草药材的基因组DNA提取条件和PCR扩增条件进行优化,大大提高了紫草药材基因组DNA的提取与扩增效率,为紫草药材的分子生物学鉴定提供支撑,同时也为其他中药民族药品种的基因组DNA提取条件优化提供了可以参考的依据。

关键词：紫草,响应面法,优化,聚合酶链式反应(PCR),内部转录间隔区2(ITS2),

基金资助：*中国食品药品检定研究院学科带头人培养基金(2021X4)