以CD79b为靶点抗体偶联药物结合活性的评价研究*

来源：药物分析杂志2022年第10期北京时间：

作者：李萌, 赵雪羽, 俞小娟, 杨雅岚, 龙彩凤, 于传飞, 王兰

单位：1.中国食品药品检定研究院,国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室, 国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室,北京 102629; 2.中国药科大学,南京 211198

摘要：目的: 建立抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE的表面等离子共振(surface plasmon resonance, SPR)法和酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法评价其结合活性。方法: 采用SPR法,使用Protein A芯片,测定抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE与其靶点CD79b蛋白之间的动力学常数包括结合常数(Ka)和解离常数(Kd)、亲和力常数(KD)、半最大效应浓度(half maximal effective concentration, EC50)及相对效价;采用经典ELISA法测定抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC50及相对效价。结果: 经3次实验测定,抗CD79b单抗与CD79b的Ka为(2.61±0.14)×106 L·mol-1·s-1,Kd为(1.87±0.12)×10-2 s-1,KD为(7.17±0.30)×10-9 mol·L-1,RSD均＜10%;抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的Ka为(2.99±0.26)×106 L·mol-1·s-1,Kd为(1.46±0.04)×10-2 s-1,KD为(4.88±0.31)×10-9 mol·L-1,RSD均＜10%。经3次实验测定,SPR法测得抗CD79b单抗与CD79b的EC50为(78.68±6.35)ng·mL-1,相对效价为(84.62±6.63)%,RSD均＜10%;测得抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC50为(35.93±0.75) ng·mL-1,相对效价为(84.74±1.76)%,RSD均＜5%。经3次实验测定,ELISA法测得抗CD79b单抗与CD79b的EC50为(22.66±0.41) ng·mL-1,相对效价为(95.70±1.74)%,RSD均＜5%;测得抗CD79b单抗-vc-MMAE与CD79b的EC50为(69.19±1.71) ng·mL-1,相对效价为(97.64±2.39)%,RSD均＜5%,SPR和ELISA 2种方法结果基本一致。结论: 建立了抗CD79b单抗及抗CD79b单抗-vc-MMAE的SPR法,并对靶点结合的动力学、亲和力进行评价,与ELISA方法在EC50及相对效价方面进行了对比,为该类抗体偶联药物的研发提供参考。

关键词：抗体偶联药物,表面等离子共振,酶联免疫吸附测定,结合活性,亲和力常数,相对效价,

基金资助：*国家药典标准提高课题:人用抗体偶联药物制品总论(2022S04)