乳腺癌患者血清雌激素及其代谢产物的液相色谱串联质谱检测方法的建立及应用*
来源：药物分析杂志2022年第10期北京时间：
作者：郝志翔, 钟雅男, 徐吟雪, 印晓星, 张蓓, 周雪妍
单位：1.徐州医科大学药学院,江苏省新药研究与临床药学重点实验室,徐州 221004; <br />\r\n2.徐州市第一人民医院药学部,徐州 221000; <br />\r\n3.徐州市中心医院妇产科,徐州 221009
摘要：目的: 建立稳定可靠的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)方法,检测雌激素雌酮(E1)、雌二醇(E2)及其代谢产物2-甲氧基雌酮(2-MeOE1)、4-甲氧基雌酮(4-MeOE1)、2-甲氧基雌二醇(2-MeOE2)、4-甲氧基雌二醇(4-MeOE2)、16α-羟基雌酮(16α-OHE1)、2-羟基雌酮(2-OHE1)、4-羟基雌酮(4-OHE1)、2-羟基雌二醇(2-OHE2)、4-羟基雌二醇(4-OHE2)共11个目标分析物的浓度水平,观察乳腺癌患者血清雌激素稳态的变化规律。方法: 利用丹磺酰氯作为衍生化试剂,对待测物进行衍生化处理,采用Agilent ZORBAX Extend-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm),以含0.1%甲酸的乙腈溶液和含0.1%甲酸的水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,柱温为25 ℃,进样量30 μL。质谱采用ESI离子源,多反映监测(MRM)的正离子扫描方式进行定量检测雌激素及其代谢产物共11个目标分析物(E1、E2、2-MeOE1、4-MeOE1、2-MeOE2、4-MeOE2、16α-OHE1、2-OHE1、4-OHE1、2-OHE2和4-OHE2)。从特异性、线性及范围、定量限、准确度和精密度、提取回收率、基质效应和稳定性等方面对建立的分析方法进行验证。用本法对41例乳腺癌患者和25例健康志愿者的血清样本进行雌激素及其代谢产物检测,比较2组间雌激素及其代谢产物的差异。结果: LC-MS/MS法可同时检测人血清中11个目标分析物的浓度,在标准曲线范围内线性良好;批内和批间精密度<15%;准确度绝对值<15%;提取回收率均>85%;基质效应在85%~115%;稳定性良好。用本方法进行临床血清雌激素及其代谢产物检测,测得对照组中E1、E2及其代谢产物2-MeOE1、4-MeOE1、2-MeOE2、4-MeOE2、16α-OHE1、2-OHE1/4-OHE1、2-OHE2、4-OHE2的浓度分别为(0.101±0.006)(0.170±0.012)(1.078±0.104)(0.086±0.008)(0.064±0.000)(0.115±0.051) (0.071±0.006) (0.132±0.023)(0.237±0.020)和(0.225±0.027) nmol·L-1,乳腺癌患者组相应的11个目标分析物的浓度分别为(0.174±0.017)(0.335±0.041)(0.958±0.080)(0.072±0.006)(0.066±0.001)(0.065±0.023)(0.097±0.007)(0.183±0.020)(0.365±0.084)和(0.366±0.082) nmol·L-1,结果表明乳腺癌患者原型雌激素(E1和E2)和羟基化雌激素(16α-OHE1,2-OHE2,4-OHE2和2/4-OHE1)的浓度显著增加,而甲氧基化雌激素(4-MeOE2)的浓度明显降低。结论: 本实验建立的血清中雌激素(E1和E2)及其代谢产物(2-MeOE1、4-MeOE1、2-MeOE2、4-MeOE2、16α-OHE1、2-OHE1、4-OHE1、2-OHE2和4-OHE2)的LC-MS/MS定量检测方法准确、快速、可靠,可作为乳腺癌患者血清雌激素及其代谢产物检测的参考方法。乳腺癌状态下,雌激素稳态失衡与乳腺癌的发生发展密切相关,雌激素可能作为乳腺癌发生发展的潜在疾病标志物。
关键词：乳腺癌,血清,原型雌激素,羟基化雌激素,甲氧基化雌激素,雌激素代谢,液相色谱串联质谱,
基金资助：*江苏省高等学校自然科学研究重大项目(18KJA350002);江苏省自然科学基金面上项目(SBK2018021825);徐州市推动科技创新专项资金项目(KC18044)
