3种mRNA疫苗dsRNA残留量检测方法的比较*

来源：药物分析杂志2022年第11期北京时间：

作者：刘晶晶, 李玉华

单位：中国食品药品检定研究院 国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及标准化重点实验室国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室,北京 102629

摘要：目的: 对mRNA疫苗dsRNA残留量的常用检测方法均相时间分辨荧光法(homogeneous time resolved fluorescence,HTRF法)、酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA法)和斑点杂交法(Dot Blot法)进行比较研究,为mRNA疫苗质量控制提供技术支撑。方法: 分别根据HTRF法、ELISA法和Dot Blot法特点,配制相应浓度标准品,通过建立标准曲线,计算样品dsRNA浓度,考察3种方法的适用性、准确度、精密度、定量限和曲线拟合关系。结果: HTRF法检测dsRNA残留量的回收率为110.7%,重复性的RSD为5.6%,中间精密度的RSD≤19.0%,在1.56~100.00 ng·mL-1的质量浓度范围内,拟合关系良好(r=0.999 3);ELISA法检测dsRNA残留量的回收率为103.2%,重复性的RSD为19.5%,中间精密度的RSD≤11.7%,在7.81~500.00 ng·mL-1的质量浓度范围内,拟合关系良好(r=0.999 8);Dot Blot法检测dsRNA残留量的回收率为101.5%,重复性的RSD为18.5%,中间精密度的RSD≤42.2%,在800.00~80 000.00 ng·mL-1的质量浓度范围内,拟合关系良好(r=0.999 2)。HTRF法和ELISA法的准确度和精密度良好,HTRF法可检测较低浓度的dsRNA残留量。结论: 3种方法均可有效检测mRNA疫苗中的dsRNA残留量。

关键词：mRNA疫苗,dsRNA残留量检测,均相时间分辨荧光法,酶联免疫法,斑点杂交法,

基金资助：^*国家重点研发计划:新型冠状病毒疫苗质量评价技术研究(2020YFC0860500)