A型肉毒抗毒素ELISA方法的建立及验证

来源：药物分析杂志2023年第3期北京时间：

作者：张玲玲, 段丽娟, 刘建光, 李育合, 谢小荣, 苏慧, 梁凌宇, 高建军

单位：兰州生物制品研究所有限责任公司血清室 甘肃省疫苗工程技术研究中心,兰州 730046

摘要：目的: 建立定量检测A型肉毒抗毒素效价的酶联免疫吸附法(ELISA法),并进行验证。方法: 以A型肉毒类毒素为包被抗原包被酶标板,封闭后加入稀释的血清样品,以辣根过氧化物酶标记的兔抗马IgG(IgG-HRP)作为酶标抗体,加入四甲基联苯胺显色剂(TMB)显色10~15 min,2 mol·L-1硫酸终止反应,于酶标仪上读取A450 nm值,以标准曲线样品浓度的对数(X)为横坐标,A450 nm值(Y)为纵坐标绘制标准曲线,将待测血清样品A450 nm值代入曲线方程即可得到血清样品浓度,乘以稀释倍数即为血清样品效价。结果: 在优化的条件下,该方法具有较高的特异性,除了与A型肉毒抗毒素血清反应外,对B、C、D、E、F型肉毒抗毒素血清均无交叉反应;在线性范围50~400 mIU·mL-1时线性关系良好,r＞0.990 0;准确度介于80%~120%;精密度(重复性和中间精密度)RSD＜20%;采用该方法测定20批A型肉毒抗毒素血清的效价范围在525~2 450 IU·mL-1,中和试验法检测范围在675~2 400 IU·mL-1,二者的相关系数r=0.906 0(P＜0.001),呈显著性正相关。结论: 建立的ELISA定量检测方法在实验室条件下可以取得稳定的结果,为A型肉毒抗毒素效价的测定提供了一种简便的体外检测方法。

关键词：A型肉毒抗毒素,ELISA方法,小鼠中和试验法,定量检测,效价测定,验证,