中药材茯苓PCR鉴定与特征*

来源：药物分析杂志2023年第3期北京时间：

作者：兰春阳, 李翔, 李佩瑶, 孟雪, 冯新源, 李明成

单位：1.北华大学医学技术学院,吉林 132013;2.吉林省中药DNA指纹检测技术科技创新中心,吉林 132013

摘要：目的: 建立针对真菌类中药材茯苓的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)鉴定技术,从分子生物学角度出发,对茯苓的真伪进行鉴定。方法: 对经典十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法进行改良,提取样品基因组DNA,以茯苓内转录间隔区(internal transcribed space,ITS)为目的序列,设计特异性引物,优化PCR反应体系,建立茯苓PCR鉴定方法,同时克隆特异性扩增的目的条带,测序鉴定其准确性,最后进行方法学验证。结果: 提取的基因组DNA浓度较高、纯度较好、完整度良好。琼脂糖凝胶电泳结果表明正品茯苓可以在199 bp处出现单一明亮的特异性扩增条带,而伪品不出现扩增条带,引物的特异性为100%,克隆后的目的片段电泳图谱清晰明亮,克隆片段与Genbank数据库中已登记的茯苓物种序列相似性高达100%。在操作人员不知样品真伪的情况对样本检测,目标条带出现位置与预期一致;灵敏度检测结果表明,DNA检测下限可达1 ng·μL-1;挑选3位实验室人员进行茯苓真伪检测,结果相同且和预期一致,建立的茯苓PCR鉴定方法特异性良好,准确性高,重复性好。结论: PCR鉴定技术为茯苓的真伪鉴别提供了简便可靠、特异性良好,并且准确性高的鉴别方法。采用分子克隆技术可以成功保存茯苓标准对照品,测序结果准确可靠。

关键词：茯苓,内转录间隔区,聚合酶链式反应方法,改良十六烷基三甲基溴化铵,分子生物学鉴定,

基金资助：*吉林省科技创新中心建设项目(No.20190902018TC);吉林省科技厅科技创新项目(No.20190304101YY,No.YDZJ202102CXJD061)