麦冬药材及饮片中掺混山麦冬的PCR-RFLP鉴别方法研究*

来源：药物分析杂志2023年第4期北京时间：

作者：张林祥, 倪琳, 赖晶, 魏锋, 宋平顺

单位：1.甘肃中医药大学药学院,兰州 730000; 2.甘肃省药品检验研究院 国家中药材及饮片质量控制重点实验室甘肃省中藏药检验检测技术工程实验室,兰州 73000; 3.中国食品药品检定研究院,北京 102629

摘要：目的: 通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法(PCR-RFLP法)建立一种能快速鉴别麦冬药材及饮片中掺混山麦冬的方法。方法: 对麦冬和山麦冬的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列酶切位点进行比对,选择山麦冬的特异性酶切位点PmlI,设计PCR-RFLP反应引物。以退火温度58 ℃、循环数为30,LR-F和LR-R鉴别引物(10 μmol·L-1)各0.5 μL,PmlI限制性内切酶在37 ℃酶切2 h的反应条件为PCR-RFLP法的参数,并进行方法学考察和统计分析。结果: 在退火温度58 ℃、循环数为30时,山麦冬或掺有山麦冬的麦冬样品经过特异性引物扩增后,能被PmlI限制性内切酶酶切,在100~250 bp之间检出2条单一DNA条带,麦冬样品则无此条带。该方法稳定性好,专属性强,能对麦冬与山麦冬饮片及掺混样品进行鉴别,并对麦冬中掺入山麦冬的检出限为5%。结论: 建立的PCR-RFLP鉴别方法稳定性好,灵敏度高,实现了麦冬与山麦冬饮片及麦冬中掺混山麦冬的快速检测,可用于麦冬与山麦冬药材真伪鉴别的补充检验方法。

关键词：麦冬,山麦冬,掺混鉴别,PCR-RFLP转录间隔区(ITS),特异性限制酶,鉴定,

基金资助：*国家重点研发计划“中医药现代化研究”重点专项(2019YFC1711500);甘肃省科技重大专项(2021GSMPA-KL02;021GSMPA-KL01)