利用分子方法鉴别白花蛇舌草及其伪品伞房花耳草*

来源：药物分析杂志2023年第4期北京时间：

作者：莫静, 王文斌, 程华春, 李小芳, 刘红, 汪波

单位：1.湖北省药品监督检验研究院, 武汉 430075; 2.湖北大学,武汉 430062; 3.湖北中医药大学, 武汉 430065

摘要：目的: 建立一种鉴别白花蛇舌草及其常见伪品伞房花耳草的分子方法,确保临床用药安全。方法: 根据白花蛇舌草和伞房花耳草内转录间隔区2(ITS2)序列的差异设计特异探针,采用多重连接探针扩增(MLPA)技术和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)技术,建立了一种能够鉴别白花蛇舌草、伞房花耳草的多重连接探针扩增-实时荧光定量PCR(MLPA-qPCR)方法。结果: 对扩增产物进行熔解曲线分析,结果显示,所设计的MLPA探针具有良好的特异性,探针之间不存在交叉反应,白花蛇舌草探针的特异性熔解曲线Tm值为(81.8±0.2) ℃,伞房花耳草探针的熔解曲线Tm值为(84.0±0.2) ℃;灵敏度分析结果表明,该方法检出白花蛇舌草和伞房花耳草的最低模板量均为0.1 ng;掺伪检测试验结果表明,当白花蛇舌草探针与伞房花耳草探针比例为1.0∶0.6时,白花蛇舌草中掺杂1%的伞房花耳草仍可被有效检出。对收集的39份样品进行检测,成功鉴别白花蛇舌草25份、伞房花耳草12份、白花蛇舌草与伞房花耳草混合样品2份。结论: 本研究所建立的MLPA-qPCR方法特异性强,灵敏度高,可作为鉴别白花蛇舌草及其常见伪品伞房花耳草的特异性鉴别方法。

关键词：多重连接探针扩增技术,白花蛇舌草,伞房花耳草,实时荧光定量PCR,熔解曲线,鉴别,掺假,

基金资助：*湖北省科技重大专项(2020ACA007);湖北省自然科学基金重点类项目(2020CFA024);中国食品药品检定研究院项目(TCM2021-YJ11)