基于COⅠ基因对中成药中土鳖虫的分子鉴别研究

来源：药物分析杂志2023年第5期北京时间：

作者：刘晶晶, 杨晶凡, 姚令文, 康帅, 王峰, 戴忠, 马双成

单位：1.中国食品药品检定研究院,北京 100050; 2.河南中医药大学,郑州 450046

摘要：目的: 建立基于线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因的分子标记技术,对中成药中土鳖虫(地鳖、冀地鳖)及其伪品进行分子鉴定的方法。方法: 收集不同地区土鳖虫正品及其伪品,对所有样品进行DNA的提取,通过对土鳖虫及其伪品DNA条形码COⅠ基因进行对比分析,设计药用土鳖虫的鉴别引物,引物序列为DBI-F(5’-GGCGTTGGCACAGGTTGGACT-3’)和DBI-R(5’-ATTTGTTCAGGTTTTATGTTG-3’)。采用两步法进行特异性聚合酶链反应(PCR)扩增,并对PCR反应体系和反应程序影响因素进行考察,从而建立特异性PCR技术对宫瘤消胶囊等11个中成药中土鳖虫的真伪进行鉴别。结果: 建立了土鳖虫快速特异性PCR反应程序,引物体系只针对土鳖虫成分DNA进行扩增,与中成药中其他药味的DNA均无交叉扩增。将其应用于11个品种13批次样品的检测,以1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物,含正品土鳖虫的批次在250 bp附近处有一清晰条带,而阴性样品无条带。结论: 通过特异性引物PCR扩增、电泳检测和克隆测序的方法,可以有效鉴别宫瘤消胶囊等11个中成药中的土鳖虫成分真伪。该方法具有快速、特异、灵敏的优点,为中成药中土鳖虫掺伪鉴定提供了分子生物学方法。

关键词：土鳖虫,中成药,COⅠ基因,DNA提取,特异性扩增,