中药材三斑海马DNA指纹鉴定方法及检测试剂的研究*

来源：药物分析杂志2023年第6期北京时间：

作者：吴楠, 孟媛, 周童, 张宇彤, 李洋洋, 刘琳, 李亚茹, 艾金霞, 高丽君, 母润红

单位：北华大学医学技术学院,吉林 132013

摘要：目的: 建立中药材三斑海马DNA指纹鉴定方法,研制三斑海马DNA检测试剂盒。方法: 利用生物信息学对海马种属的Cytb基因进行分析,以该基因作为靶基因,设计特异性引物,研制三斑海马DNA提取及PCR快速检测试剂,应用分子克隆及测序技术,克隆三斑海马阳性对照药材,并对快速检测试剂盒的特异性、稳定性、重复性及灵敏度进行考察,对市售三斑海马样品进行真伪鉴定。结果: 基于Cytb序列可对三斑海马及其混伪品进行区分。自主研发的三斑海马快速检测试剂提取的海马DNA纯度和浓度均可达到PCR的要求,在退火温度为61.5 ℃时引物特异性最强;克隆测序后三斑海马DNA序列与海马mtDNA Cytb特异指纹区段序列一致;自主研制的试剂重现性、稳定性良好,检测浓度最低限为10-3ng·μL-1;对17个市售样品进行检测,合格率为88.2%。结论: 建立了一种特异、准确的检测中药材三斑海马DNA指纹鉴定方法;研制的三斑海马DNA检测试剂盒操作简便,灵敏度高,检测结果稳定。

关键词：三斑海马,DNA指纹鉴定,Cytb,检测试剂,DNA 提取方法,聚合酶链式反应,分子克隆,

基金资助：*吉林省科技发展计划项目资助(20200404152YY);吉林省科技发展计划项目资助(20200403047SF);吉林省科技发展计划项目资助(20210204185YY)