基于核酸免疫活性分析的卡介菌生物制剂质量评价*

来源：药物分析杂志2023年第6期北京时间：

作者：黄胜, 杨胜梅, 张兰艳, 谢敏, 周云喜, 童春义

单位：1.九芝堂股份有限公司,长沙 410021; 2.湖南斯奇生物制药有限公司,长沙 410205; 3.中南大学湘雅三医院,长沙 400013; 4.湖南大学生物学院,长沙 410082

摘要：目的: 开发生物制剂卡介菌多糖核酸注射液质量评价方法。方法: 基于核酸物质是卡介菌多糖核酸注射液(简称注射液)的主要活性成分之一,其免疫活性表现可反映注射液质量。以免疫核酸CpG1826为标准参比核酸,非CpG核酸No-CpG为空白参比核酸,注射液或所含核酸组份为测试核酸,采用酶联免疫(ELISA试剂盒)法测定核酸刺激巨噬细胞释放细胞因子TNF-α的浓度([TNF-α]),再采用公式IFC=([TNF-α]测-[TNF-α]空)/([TNF-α]标-[TNF-α]空)计算功能指数(IFC),根据IFC大小来评价生物制剂质量。对15批次标准样品(合格产品)进行多次平行测定,训练确定合格产品的IFC范围,再用11批次实际样品(6批次合格产品,5批次超期产品)进行方法验证。结果: 从注射液提取核酸组分可显著刺激巨噬细胞释放细胞因子TNF-α,刺激现象与免疫CpG核酸一致,说明注射液中核酸物质具有类似免疫活性;15批次标准样品训练确定IFC范围为0.3~0.9;11批次实际样品中,6批次合格产品IFC在范围之内,5批次超期产品IFC偏高。结论: 基于核酸免疫活性分析技术建立的功能指数IFC较好反应了卡介菌多糖核酸注射液质量,可望用于其质量评价,也为类似生物制剂质量控制提供活性评价参考。

关键词：卡介菌,酶联免疫吸附检测,胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸,抗肿瘤坏死因子-α,功能指数,

基金资助：*湖南省高新技术产业科技创新引领计划(科技攻关类)项目(2020SK2043)