CGE-LIF方法分析重组腺相关病毒(rAAV)衣壳蛋白的比例含量*

来源：药物分析杂志2023年第11期北京时间：

作者：李响, 高铁, 史新昌, 陈泓序, 唐红梅, 秦玺, 周勇

单位：1.中国食品药品检定研究院 卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室, 北京 100050;2.SCIEX中国,北京 100015

摘要：目的:建立毛细管凝胶电泳串联激光诱导荧光检测器(CGE-LIF)方法分析重组腺相关病毒(rAAV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3比例含量并进行方法学验证。方法:CGE-LIF分析rAAV衣壳蛋白方法为:rAAV 样品加入4% SDS-150 mmol·L-1 NEM的溶液预变性(70 ℃,5 min);再加入P503染料标记(70 ℃,10 min);再加入1%SDS进行变性(70 ℃,5 min),然后混匀上机检测。方法验证包括准确性、精密度、线性、检测限、定量限,耐用性等。另外考察了P503、TAMRA、FQ 3种染料条件及rAAV不同血清型和部分批间一致性。结果:CGE-LIF分析不同血清型rAAV(包括2、5、8、9、10型)可将其衣壳蛋白VP1、VP2和VP3基线分离并且峰形尖锐。准确性显示衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的实测结果与预期结果的相关系数r>0.99;重复性结果显示每个衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的迁移时间RSD均<1.5%,校正峰面积百分比的RSD均<5%;中间精密度结果显示衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的迁移时间RSD均<1.5%,校正峰面积百分比RSD均<5%;线性结果显示在0.6×1012~3.0×1012 vg·mL-1范围内与衣壳蛋白校正峰面积线性关系良好;VP3检测限和定量限分别为7.2×1010 vg·mL-1和2.2×1011 vg·mL-1。用3种不同染料(P503、FQ和TAMRA)进行CGE-LIF检测,结果良好。该方法的批间稳定结果较为理想。结论:建立了rAAV衣壳蛋白CGE-LIF分析方法,所建方法可以对rAAV产品3种衣壳蛋白进行分离和相对定量。

关键词：毛细管凝胶电泳,重组腺相关病毒(rAAV),衣壳蛋白,LIF检测器,比例含量,

基金资助：*国家质量基础设施资助(2021YFF0600804)