报告基因法检测IL-1Ra生物学活性的研究

来源：药物分析杂志2023年第12期北京时间：

作者：俞露, 刘玉林, 郑依涵, 彭炳淮, 刘景会

单位：长春生物制品研究所有限责任公司,长春 130000

摘要：目的:建立报告基因法(reporter gene assay,RGA)检测重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)生物学活性。方法:通过IL-β刺激D10G4.1-NFκB-Luc细胞产生荧光,IL-1Ra抑制此反应,且抑制的效果与其用量具有线性关系测定其生物学活性。对细胞密度、刺激性物质IL-1β的量、拮抗物质IL-1Ra的量、稀释梯度及孵育时间等进行摸索后建立方法,对方法的准确度、线性范围、专属性和耐用性进行考察;用建立的方法与通用法:A375.S2细胞活性法进行比对。结果:成功建立了RGA检测IL-1Ra生物学活性,该方法在效价水平范围50%~160%检测结果的相对偏差均在±12%范围内,回归方程的斜率为1.001 3,相关系数为0.999 8,对不同细胞代次、细胞密度及培养时间考察耐用性的几何变异(GCV)为4.0%。方法耗时较短,检测结果与A375.S2细胞活性法一致,且精密度及准确性都具有显著提高。结论:成功建立了报告基因法检测IL-1Ra生物学活性,并通过了方法验证,可替代A375.S2细胞活性法用于产品的质量控制。

关键词：重组人白细胞介素-1受体拮抗剂,IL-1β,报告基因法,方法学验证,