泰它西普免疫原性分析方法建立及验证

来源：药物分析杂志2024年第2期北京时间：

作者：吴白杨, 刘志浩, 刘美玲, 王凌, 姜静

单位：1.滨州医学院,烟台 264003; 2.荣昌生物制药(烟台)股份有限公司,烟台 264006

摘要：目的:建立桥式酶联免疫吸附法测定食蟹猴血清中抗药抗体(anti-drug antibody,ADA)和竞争酶联免疫吸附法测定中和抗体(neutralizing antibody,NAb),并进行方法学验证。方法:桥式酶联免疫吸附法在96孔板预包被泰它西普(代号:RC18),与待测样品中的抗RC18抗体结合形成复合物,依次加入生物素化的RC18(Biotin-RC18)、辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(SA-HRP)和四甲基联苯胺底物(TMB)显色,终止反应后在酶标仪450 nm /630 nm波长处读取吸收度。竞争酶联免疫吸附法在96孔板预包被B细胞激活因子或增殖诱导配体蛋白,加入与Biotin-RC18预混合的样品,形成B细胞激活因子或增殖诱导配体-抗RC18抗体-Biotin-RC18三者的复合物,依次加入SA-HRP和TMB显色,终止反应后在酶标仪上读取吸收度。结果:桥式酶联免疫吸附法线性范围的精密度≤12.32%,灵敏度为50 ng·mL-1,筛选临界阈值为0.937,确证临界阈值为23.62%。竞争酶联免疫吸附法方法线性范围的精密度≤20%,灵敏度为312.50 ng·mL-1,针对靶标B细胞激活因子和增殖诱导配体的NAb活性,判断阈值分别为0.79和0.69,可耐受血清中RC18的药物浓度分别为2.5和5 μg·mL-1。结论:方法学验证结果表明,桥式酶联免疫吸附法及竞争酶联免疫吸附法均符合临床前生物制品免疫原性研究的要求,可用于食蟹猴血清中ADA及ADA阳性样本NAb的检测。

关键词：泰它西普,免疫原性,抗药抗体,中和抗体,桥式酶联免疫吸附法,竞争酶联免疫吸附法,