基于酶促恒温扩增技术快速鉴别天麻真伪检测方法的建立与应用*

来源：药物分析杂志2024年第4期北京时间：

作者：马秋贺, 马玉贺, 李涛, 刘悦, 柴金军, 徐子强, 刘昂, 高丽君, 夏薇, 李明成, 曲永梅

单位：1.北华大学医学技术学院,吉林 132013;2.吉林省中药DNA指纹检测技术科技创新中心,吉林 132013;3.吉林国安药业有限公司,吉林 132013

摘要：目的: 基于酶促恒温扩增(enzymatic recombinase amplification, ERA)技术建立一种可快速定性鉴别道地药材天麻真伪的方法。方法: 遵循ERA引物设计原则,应用Oligo 7.0软件根据天麻及其常见伪品的ITS2基因组序列,筛选优化天麻ERA特异性引物,应用Primer Premier 5.0软件设计天麻特异性PCR鉴别引物,通过对ERA、PCR反应体系的优化,最终确定ERA最佳反应时间为17 min,最适反应温度为40 ℃;PCR最优退火温度为57 ℃,循环为32次,对所建立的方法进行灵敏度、特异性验证,并选取中药市场市售天麻样品进行检测。结果: 所设计的天麻ERA鉴别引物与其常见伪品间无交叉反应,特异性良好;重复性结果显示,3次重复性检测结果一致,未出现假阳性与假阴性;该方法对天麻基因组DNA的灵敏度为1 pg·μL-1,比传统PCR灵敏性高;ERA技术能够用于天麻市售样品的快速鉴定,且检测结果与PCR方法相同。结论: 所建立的检测方法操作简单、快速,具有较高的特异性和灵敏度,为道地药材天麻的真伪鉴别提供了一种新手段。

关键词：酶促恒温扩增,聚合酶链式反应,天麻,定性,真伪鉴定,快速检测,

基金资助：^*医药健康产业发展专项(20230401096YY);北华大学研究生创新计划项目【2022】058号;吉林省科技厅重点科技成果转化项目(20170307001YY)