土鳖虫(地鳖)配方颗粒的特异性PCR鉴别研究

来源：药物分析杂志2024年第11期北京时间：

作者：刘闪闪, 谭斯尹, 宋叶, 冼乐尧, 范耀耀, 罗宇琴, 李国卫

单位：广东一方制药有限公司 广东省中药配方颗粒企业重点实验室,佛山 528244

摘要：目的:建立基于SNP位点的特异性PCR技术对土鳖虫(地鳖)配方颗粒及其混伪品的分子鉴定方法。方法:通过分析土鳖虫与其常见伪品的细胞色素C氧化酶亚基1(COⅠ)序列,寻找土鳖虫SNP变异位点,设计出特异性引物TBC-F(5’-TTCTTGTTGGCAAGCAGTATAAT-3’)和TBC-R(5’-AACTACTGCTCAAACAAATAATGGA-3’)。采用三步法进行聚合酶链式反应(PCR),并通过方法优化,确立最佳反应体系,同时为保证试验结果的准确性,将PCR扩增产物进行一代测序。结果:在退火温度为55~57 ℃,循环数为37次的扩增条件下,21批土鳖虫药材、20批标准汤剂及其19批配方颗粒经PCR扩增及凝胶电泳检测后,在237 bp处有单一明亮的特异性条带,其伪品无条带,试验结果与一代测序结果一致,为地鳖。结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确对土鳖虫药材、标准汤剂冻干粉、配方颗粒成品进行鉴别,为土鳖虫的配方颗粒质量标准研究提供了参考依据。

关键词：土鳖虫(地鳖),配方颗粒,细胞色素C氧化酶亚基1基因,混伪品,特异性聚合酶链式反应,分子鉴别,