液质联用鉴定重组CHO细胞株目的蛋白的表达研究

来源：药物分析杂志2025年第1期北京时间：

作者：康赵飞, 王可心, 韩春乐, 庞琳, 饶春明

单位：北京昭衍药物检定研究有限公司,北京 102600

摘要：目的: 采用高分辨四极杆-飞行时间液质联用（LC-Q TOF MS）技术,探索重组中国仓鼠卵巢（CHO）细胞株目的蛋白的表达鉴定方法。方法: 选择1株表达抗体的重组CHO细胞株,将该细胞悬液12 500 r · min-1离心10 min,取上清液,使用碳酸氢铵溶液（50 mmol · L-1）置换液体,加入胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）进行酶切,采用Advance Bio Peptide（100 mm×2.1 mm, 2.7 μm）色谱柱,通过Sciex TRIPLE TOF 5600+与Agilent Q TOF G6545 2台液质联用仪进行对比分析。根据保密要求和氨基酸覆盖率选择合适的特征肽段,并将该抗体目的蛋白重链与轻链的特征肽氨基酸序列分别输入SCIEX BioPharmaView Version 3.0与Agilent MassHunter BioConfirm 12.0软件中,建立数据库,对样品中实际检测得到的肽段进行搜库检索,验证并鉴定出目的蛋白特征肽。结果: 样品通过Sciex TRIPLE TOF 5600+仪器分析得到8条特征肽段,氨基酸覆盖率为100%;样品通过Agilent Q TOF G6545仪器分析得到12条特征肽段,氨基酸覆盖率为100%。结论: 本研究建立的方法操作简单,覆盖率高,稳定性好,可用于该抗体重组CHO细胞株目的蛋白的表达鉴定,也可为同类细胞株其他蛋白的表达鉴定提供参考。

关键词：重组蛋白,液质联用,氨基酸序列,特征肽鉴定,胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶,