间充质干细胞产品生物学活性检测方法建立*

来源：药物分析杂志2025年第1期北京时间：

作者：王瑶, 房吉庆, 袁子维, 李瑶玲, 杨英, 饶春明

单位：北京昭衍药物检定研究有限公司,北京 102605

摘要：目的: 建立间充质干细胞（MSCs）生物学活性检测方法,应用于MSCs产品的质量控制。方法: 采用流式细胞术检测MSCs表面标志物;采用抗坏血酸、β-甘油磷酸钠等诱导MSCs成骨分化,诱导后用茜素红S染色,检测成骨分化能力;采用IBMX、罗格列酮等诱导MSCs成脂分化,诱导后用油红O染色,检测成脂分化能力;采用ITS、TGF-β3等诱导MSCs成软骨分化,诱导后用阿利新蓝染色,检测成软骨分化能力;采用细胞共培养和ELISA方法检测MSCs对巨噬细胞极化的作用,将THP-1细胞诱导为巨噬细胞后与MSCs共培养,ELISA方法检测共培养上清中IL-10、TNFα表达水平;采用CFSE标记细胞法、CD3/CD28刺激PBMC活化法和细胞共培养方法,用流式细胞术检测MSCs对淋巴细胞增殖抑制的能力。结果: 间充质干细胞表面标志物CD105、CD73和CD90表达均≥95%,CD45、CD34、CD14、CD19和HLA-DR表达≤2%;MSCs经成骨诱导分化后显微镜下可观察到红色钙结节;MSCs经成脂诱导分化后显微镜下可见红色的脂质空泡,呈典型的脂质分化;MSCs经软骨诱导分化形成软骨细胞球,显微镜下可见典型的软骨陷窝;MSCs与诱导的THP-1巨噬细胞共培养后,MSCs能刺激IL-10表达增多,并下调TNFα分泌;MSCs对CD3/CD28活化后的PBMC的增殖具有抑制作用,抑制率为76.4%。结论: 本研究建立了MSCs表面标志物、分化能力、促进巨噬细胞极化和淋巴细胞增殖抑制的检测方法,可用于MSCs产品生物学活性检测。

关键词：间充质干细胞,表面标志物,分化,免疫调控,巨噬细胞极化,淋巴细胞增殖抑制,

基金资助：北京市科技计划课题：基因修饰免疫细胞和基因治疗药物质量控制关键技术与服务平台建设（Z221100007922015）