酶联免疫吸附法测定高浓度静注人免疫球蛋白中人凝血因子Ⅻ与前激肽释放酶的残留量*

来源：药物分析杂志2025年第3期北京时间：

作者：余雨蓉, 刘勇, 杨龙, 唐良玉, 肖春桥, 李丹, 菅长永

单位：1.贵州泰邦生物制品有限公司,贵阳 550025; 2. 贵阳康养职业大学,贵阳 550081

摘要：目的: 建立酶联免疫吸附（ELISA）方法分别检测高浓度静注人免疫球蛋白制品（10%IVIG）中人凝血因子Ⅻ（factor Ⅻ,FⅫ）和前激肽释放酶（prekallikrein,PK）的残留量,并对该方法进行验证。方法: FⅫ、PK特异性抗体预包被在微孔板上并封闭。10%IVIG中的FⅫ、PK分别与预包被抗体结合反应,经洗涤,分别加入FⅫ、PK特异性生物素化检测抗体与结合抗体反应,经第2次洗涤后,分别加入辣根过氧化物酶、链霉亲和素-过氧化物酶反应,再加入显色剂反应后,添加终止液终止反应,置于酶标仪450 nm波长处测定吸收度。参照2020年版《中华人民共和国药典》验证检测方法,并采用经验证的方法对10%IVIG工艺中间品、成品中FⅫ、PK残留量进行测定。结果: 验证结果如下：稀释线性显示FⅫ检测方法存在基质效应,PK检测方法存在钩状效应,可分别通过稀释5~20倍、80~120倍解决;加标实验测定结果的平均回收率分别为110.3%、99.1%,RSD分别为3.6%、2.7%,该方法准确度良好;重复性测定结果的RSD分别为8.3%、7.7%;中间精密度实验的RSD分别为7.0%、9.2%;方法精密度良好;定量限精密度验证符合要求,定量限分别为1.0、1.25 ng · mL-1;该方法在线性范围内线性关系良好（r=0.999 9）。耐用性验证了孵育时间、试剂盒开启有效期以及不同批号试剂盒,结果显示方法的耐用性良好。应用该方法检测10%IVIG中FⅫ、PK残留量均维持较低水平,说明辛酸沉淀结合2步阴离子层析工艺能够较好地去除10%IVIG中的FⅫ、PK。结论: 建立的方法适用性良好,能够满足实验室对10%IVIG静注人免疫球蛋白中FⅫ、PK残留量的测定。

关键词：高浓度静注人免疫球蛋白,人凝血因子Ⅻ,前激肽释放酶,酶联免疫吸附法,基质效应,钩状效应,

基金资助：贵州省科技计划项目（黔科合成果[2024]一般148）;贵州省工业和信息化发展专项科技创新项目（KJ202143）