SARS-CoV-2重组蛋白疫苗（CHO细胞）体外相对效力双抗体夹心ELISA检测方法建立与验证*

来源：药物分析杂志2025年第3期北京时间：

作者：曹莎莎, 何鹏, 刘晓雅, 刘莹, 刘宇, 马志桃, 韦芬, 王佳霁, 胡忠玉

单位：1.安徽智飞龙科马生物制药有限公司,合肥 230088; 2.中国食品药品检定研究院 药品监管科学全国重点实验室国家卫生健康委生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室 国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室,北京 102629

摘要：目的: 建立严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型（SARS-CoV-2）重组蛋白疫苗（CHO细胞）体外相对效力的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证。方法: 采用基因重组技术制备抗SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合区（receptor binding domain,RBD）的人源单克隆抗体GH4及CB6。以GH4为包被抗体,HRP标记的CB6（CB6-HRP）为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,考察GH4和CB6-HRP的适宜工作浓度。开展方法学验证,验证项目为线性与范围、专属性、精密度（重复性、中间精密度）、准确度和耐用性。采用建立的方法检测3批工艺验证批及22批持续工艺确认批SARS-CoV-2重组蛋白疫苗（CHO细胞）的体外相对效力。结果: GH4及CB6-HRP的适宜工作浓度分别为1 000 ng · mL-1和31.25 ng · mL-1。疫苗参考品质量浓度在0.312 5~5ng · mL-1范围内与A450呈良好的对数线性关系,回归方程斜率均在0.80~1.25范围内,R2均>0.99;建立的方法可特异性检测SARS-CoV-2重组蛋白疫苗（CHO细胞）,与MERS重组蛋白疫苗、流感病毒疫苗、狂犬病毒疫苗及CHO宿主细胞蛋白等均无交叉反应;精密度验证时,重复性的几何变异系数（geometric coefficient of variation,GCV）分布在1.6%~2.4%范围内,中间精密度的GCV在1.2%~2.6%范围内;准确度验证时,回归方程R2为0.994 5,斜率为0.999 5在0.80~1.25范围内,相对偏倚（relative bias,RB）分布在-4.04%~7.36%范围内;耐用性验证中,不同考察条件下体外相对效力测定值在0.96~1.08范围内。3批工艺验证批SARS-CoV-2重组蛋白疫苗（CHO细胞）体外相对效力均值为1.02,GCV为4.8%;22批持续工艺确认批SARS-CoV-2重组蛋白疫苗（CHO细胞）体外相对效力在0.81~1.23范围内,几何均值为1.04,GCV为4.4%。结论: 建立的双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的特异性、精密度、准确度及耐受性,可用于SARS-CoV-2重组蛋白疫苗（CHO细胞）体外相对效力检测及质量控制。

关键词：严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型,重组蛋白疫苗,酶联免疫吸附法,双抗体夹心法,体外相对效力,

基金资助：十四五重点研发专项基于颗粒型佐剂的疫苗精准组装、递送及质量标准课题项目（2021YFC2302600）