基于表位模拟肽的样品纯化技术用于人血清中曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的质谱定量分析*

来源：药物分析杂志2025年第4期北京时间：

作者：王嘉郡, 韦倩倩, 黄硕, 刘凯迪, 宋宇博, 刘九洋, 吴建华, 刘亮, 吴东方

单位：1.武汉大学中南医院药学部,武汉 430071; 2.武汉大学,武汉 430072; 3.武汉大学中南医院甲乳外科,武汉 430071

摘要：目的: 以模拟肽作为纯化技术开发一种可同时测定人血清中曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的LC-MS/MS方法。方法: 首先利用链霉素磁珠固定表位模拟肽CSGSGSFYEILH,并将其作为捕获探针从血清样本中捕获曲妥珠单抗和帕妥珠单抗,然后进行还原、烷基化、胰蛋白酶酶切,并使用LC-MS/MS进行定量。应用MRM正离子模式进行检测,采用安捷伦SB C18（30 mm×2.1 mm,2.7 μm）色谱柱,柱温40 ℃,流速0.3 mL · min-1,以水（0.1%甲酸）（A）-乙腈（0.1%甲酸）（B）为流动相,梯度洗脱;曲妥珠单抗的监测离子对m/z 485.5/234.0、m/z 485.5/335.5、m/z 485.5/608.3,帕妥珠单抗的监测离子对为m/z 419.4/249.4、m/z 419.4/476.2、m/z 419.4/589.6。在此过程中考察了捕获探针的吸附能力及吸附动力学、特征肽的酶切效率以及酶切时间,并对方法学进行了验证。结果: 以模拟肽作为捕获探针,对靶标单抗曲妥珠单抗和帕妥珠单抗具有良好的结合能力,并能够在1 h内完成结合。将此探针应用到新方法,曲妥珠单抗和帕妥珠单抗的测定线性范围均为0.200~200 μg · mL-1,定量限均为0.2 μg · mL-1。日内和日间精密度（RSD）均在11.3%和12.1%以内,准确度（相对偏差）在12.1%和11.5%以内。该方法能够准确测定12例共给药患者的单抗血清浓度,测得的曲妥珠单抗浓度范围为13.75~59.12 μg · mL-1,帕妥珠单抗浓度范围为37.55~127.20 μg · mL-1。结论: 该检测方法克服了通用的蛋白A/G亲和分离纯化技术应用于LC-MS/MS检测单抗时存在整体费用高,稳定性低,活性可能丢失等缺点,为实现临床个体化精准治疗提供了一种有前景的技术方法,尤其是对于单克隆抗体（mAb）联合给药方案的患者。

关键词：表位模拟肽,单克隆抗体,液质联用,曲妥珠单抗,帕妥珠单抗,血药浓度监测,乳腺癌,共给药,

基金资助：国家自然科学基金项目（82002252）;湖北省自然科学基金项目（2023AFB640）;湖北省青年科技人才托举工程（202303）;中华医学会临床药学分会临床药学科研基金项目（Z-2021-46-2101）;中国药学会医院药学科研基金项目（CPA-Z05-ZC-2023002）;武汉大学中南医院青年交叉项目基金项目（ZNQNJC2023010）