探索液质联用技术鉴定间充质干细胞表面标志蛋白*

来源：药物分析杂志2025年第7期北京时间：

作者：王可心, 廉亦冰, 王瑶, 张拓, 韩春乐, 饶春明

单位：1.北京昭衍药物检定研究有限公司, 北京 102600; 2.沃特世科技（北京）有限公司, 北京 102600

摘要：目的: 采用液质联用（LC-MS/MS）技术分析间充质干细胞（MSCs）表面标志蛋白,探索MSCs表面标志蛋白鉴定新方法。方法: 用RIPA裂解液裂解MSCs,用BCA试剂盒定量细胞裂解液蛋白浓度,将MSCs蛋白还原烷基化后用胰蛋白酶酶切,酶切肽段进行LC-MS/MS分析。采用ACQUITY Premier Peptide BEH C18（150 mm×2.1 mm,1.7 µm）色谱柱,以含0.1%甲酸的水溶液（A）-含0.1%甲酸的乙腈溶液（B）为流动相,梯度洗脱,流速0.2 mL · min-1;质谱仪采用正离子、灵敏度、数据依赖型（DDA）模式采集数据,毛细管电压2.5 kV,锥孔电压40 V,离子源温度120 ℃,扫描范围m/z 50~2 000;将采集的质谱数据导入到waters connect软件中进行搜库检索,前体离子的质量容差为0.001%,碎片离子的质量容差为0.002%,设置至少3个b/y离子匹配为肽鉴定的标准。结果: 通过DDA模式,鉴定到MSCs阳性标志蛋白CD90;进一步在DDA模式下引入Include list,鉴定到阳性标志蛋白CD73,但还未能鉴定到阳性标志蛋白CD105;阴性标志蛋白CD34、CD45、CD14、CD19、CD79a及HLA-‍DR未检出。结论: LC-MS/MS技术具有快速、准确及不依赖于抗体的特点,已分析出2个阳性标志蛋白,通过进一步研究和方法探索,有望用于MSCs表面标志蛋白及目标蛋白的鉴定。

关键词：液质联用,间充质干细胞（MSCs）,表面标志蛋白,鉴别,数据依赖型采集（DDA）,胰蛋白酶,

基金资助：^*2022年度北京市科委CGT课题研究任务——基因修饰免疫细胞和基因治疗药物质量控制关键技术与服务平台建设（Z221100007922015）