人间充质干细胞对于生产中可能引入的牛、猪源性病毒易感性研究*

来源：药物分析杂志2025年第7期北京时间：

作者：曹译丹, 王艳辉, 崔梦姗, 王新乐, 张峒, 董莹莹, 张瑞瑞, 陈晓菲, 刘明月, 李慧婷, 付欣悦, 庞琳, 饶春明

单位：北京昭衍药物检定研究有限公司, 北京 100176

摘要：目的: 使用不同种牛、猪源病毒感染人间充质干细胞（HMSC）,并通过对比牛、猪源病毒感染人源细胞系293T/17和MRC-5后的感染和扩增情况,综合分析HMSC对常见猪、牛源病毒的易感性。方法: 将HMSC、人胚肺成纤维细胞（MRC-5）、人胚肾细胞（293T/17细胞）、非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）以及猪肾细胞（PK-15细胞）分别按照7×103个 · cm-1接种24孔板和25 cm2培养瓶,分别以感染复数（MOI）为0.02接种猪细小病毒（PPV）;将HMSC、MRC-5、293T/17细胞、Vero细胞以及牛鼻甲骨（BT）细胞分别按照7×103个 · cm-1接种24孔板和25 cm2培养瓶,分别以MOI为0.02接种牛细小病毒（BPV）、牛腹泻病毒（BVDV）、牛副流感病毒3型（PI3病毒）、牛腺病毒3型（BAV-3）以及呼肠孤病毒（REO-3）,其中24孔板细胞培养7 d,25 cm2培养瓶细胞盲传3代,第3代盲传至24孔板,各代次分别进行细胞病变观察、免疫荧光检测和病毒核酸qPCR检测。结果: 与PPV敏感细胞PK-15相比,接种PPV后的Vero、HMSC和MRC-5各代均未观察到细胞病变和荧光,PPV拷贝数随着传代次数持续下降,而293T/17细胞虽未观察到细胞病变,但在盲传3代后观察到绿色荧光,且PPV拷贝数持续维持在较高水平,为1.49× 107 copies · mL-1。与牛源病毒敏感细胞BT细胞相比HMSC对PI3、REO-3、BPV这3种牛源检测相关病毒也呈现出易感性,感染后均能产生不同程度的细胞病变和免疫荧光阳性,通过qPCR法均能检测到对应病毒核酸,其中PI3、REO-3可以在HMSC中扩增,但扩增水平低于293T/17。结论: HMSC和MRC-5相似,对BPV、REO-3和PI3病毒易感染,对PPV、BVDV和BAV-3病毒不易感染;293T/17细胞对PPV、REO-3和PI3病毒易感,对BPV、BVDV和BAV-3病毒不易感染。在HMSC的病毒安全风险控制中,如引入猪源或牛源动物源性材料,应更加关注BPV、REO-3和PI3病毒的感染风险。

关键词：人间充质干细胞,动物源原材料,病毒安全防控,牛源病毒,猪源病毒,外源病毒因子检测,

基金资助：^*2022年度北京市科委CGT课题研究任务——基因修饰免疫细胞和基因治疗药物质量控制关键技术与服务平台建设（Z221100007922015）