华蟾酥毒基间接竞争ELISA方法建立并用于腹痛水成分测定*

来源：药物分析杂志2025年第9期北京时间：

作者：孙颖, 章秀波, 刘程林子, 项乾, 谢伟, 汪景, 胡昌元, 高梦鸽, 段合波, 李华渊

单位：1.武汉云克隆科技股份有限公司,武汉 430056;2.武汉优尔生检测中心有限公司,武汉 430056;3.武汉云克隆动物有限公司,武汉 430056

摘要：目的: 制备可特异性识别华蟾酥毒基（CBG）的单克隆抗体,建立特异、快速定量检测CBG的方法,并用于对腹痛水中CBG的含量检测。方法: 将CBG和载体蛋白偶联,合成人工抗原,免疫BALB/c小鼠后,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附试验（icELISA）,并检测不同批次腹痛水中CBG的含量。结果: 实验成功筛选出2株抗CBG单克隆抗体：C1和C6,效价分别为1 ∶ 90 000和1 ∶ 810 000。利用C6抗体建立icELISA,灵敏度IC50为15.92 ng · mL-1,线性范围（IC20~IC80）为2.45~103.42 ng · mL-1,检测限IC10为1.32 ng · mL-1。交叉反应结果显示,抗CBG单克隆抗体与脂蟾毒配基和蟾毒灵的交叉反应率分别为9.37%和0.03%,与脱氧胆酸和雄酮的交叉反应率均小于0.01%。回收试验显示批内和批间回收率分别为92%~115%和92%~106%,精密度试验显示批内和批间浓度测定值的RSD均小于10%。使用建立的icELISA检测5批次腹痛水中CBG的含量为5.06~6.07 μg · mL-1,与HPLC结果一致。结论: 本研究制备了CBG特异性的单克隆抗体,用其建立了icELISA检测方法,使用该方法对5批次腹痛水中CBG含量的检测显示其批间一致性较好。

关键词：华蟾酥毒基,单克隆抗体,间接竞争酶联免疫吸附试验,定量,腹痛水,

基金资助：科技部科技型中小企业技术创新项目（11C26214202665）;武汉经济技术开发区车谷英才计划（2251-4）