干细胞制品HIV-1病毒检测RT-qPCR方法的建立*

来源：药物分析杂志2025年第10期北京时间：

作者：袁子维, 王瑶, 李瑶玲, 房吉庆, 杨英, 饶春明

单位：北京昭衍药物检定研究有限公司,北京 102605

摘要：目的: 建立一种多引物对检测HIV-1病毒的逆转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）方法,用于干细胞产品的病毒安全性质量控制。方法: 利用SnapGene软件,选择HIV-1病毒gag-pol基因相对保守位置设计多组模板引物探针,建立RT-qPCR探针法,验证方法的特异性、灵敏度、精密度和耐用性。结果: 本方法共设计6组引物探针,可检测到83.0%的HIV-1病毒,hMSCs无明显扩增曲线,加标回收率为70%~130%;检测灵敏度为2 copies · μL-1;重复性验证通过检测3个不同拷贝浓度质粒对照品（2×107、2×105、2×103 copies · μL-1）进行评价,3个浓度的3次重复检测的RSD为2.2%~8.3%;使用不同型号荧光定量PCR系统对上述3个浓度质粒对照品进行耐用性验证,结果显示RSD为0.34%~2.3%。结论: 本研究建立的检测HIV-1病毒的方法特异性和重复性好,灵敏度高,经验证可用于生产检定用细胞基质、干细胞制品HIV-1的检测。

关键词：人类免疫缺陷病毒（HIV）,实时荧光定量PCR,探针法,假病毒,方法学验证,人间充质干细胞,

基金资助：北京市科技计划课题：基因修饰免疫细胞和基因治疗药物质量控制关键技术与服务平台建设（Z221100007922015）