聚乙二醇化人粒细胞刺激因子相对修饰度SEC-HPLC-UV-RI检测方法的研究*

来源：药物分析杂志2025年第11期北京时间：

作者：焦旭雯, 史新昌, 魏长龙, 梁文玥, 梁蔚阳, 梁成罡

单位：1.广东省药品检验所 国家药品监督管理局血液制品质量控制重点实验室,广州 510663; 2.中国食品药品检定研究院 国家卫生健康委员会生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室 国家药品监督管理局生物制品质量研究与评价重点实验室,北京 100050

摘要：目的：利用尺寸排阻色谱-高效液相色谱-紫外检测-示差折光检测（SEC-HPLC-UV-RI）联用技术,检测聚乙二醇化人粒细胞刺激因子（PEG-G）修饰度。方法：采用TSK Gel G3000 SWxl（7.8 mm×300 mm,5 μm）色谱柱,以溶液A（称取磷酸二氢钾0.272 g、磷酸氢二钠0.532 g、氯化钠6.43 g,加适量水溶解,用氢氧化钠或磷酸调pH至6.9,加水至1 L,0.45 µm滤膜过滤）-乙醇溶液（90 ∶ 10）为流动相,流速0.5 mL · min-1,进样量100 μL（应不低于6 μg）,柱温30 ℃。紫外检测器和示差检测器联用,并使用同质的PEG-G对照品,通过比较UV和RI峰面积,计算供试品修饰度（%）。对建立的方法进行准确性、重复性、线性、范围、检测限、定量限等方法学验证。结果：PEG-G对照品浓度为50~200 μg · mL-1时,UV和RI峰面积线性规律明显,且准确度均在90%以上。不同企业、不同批次样品的相对修饰度检测结果为75%~125%;修饰位点修饰折算后为15%~25%,均符合预期实验结果。结论：本研究为PEG-G品种质量标准提高和规范提供数据支持。

关键词：聚乙二醇化,人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）,修饰度,分子排阻色谱（SEC）,紫外-可见光检测器（UV）,示差检测器（RI）,

基金资助：国家质量基础设施体系项目资助（2021YFF0600804）;国家质量标准提高课题（2023S001）;广东省药品监督管理局科技创新项目（2023ZDZ02、2023YDZ02、2023YDZ04）