报告基因法测定地舒单抗效价及其方法学验证

来源：药物分析杂志2026年第2期北京时间：

作者：韩阿绒, 沈红, 丁满生, 代虎, 费倩岚, 夏晓雨, 赵龙山

单位：1.沈阳药科大学药学院;沈阳 110016;2.江苏泰康生物医药有限公司,泰州 225300

摘要：目的:建立基于报告基因法（RGA）的细胞系及检测方法,用于地舒单抗的生物学活性测定。方法:通过转基因技术将含有RANK基因的质粒和含有NF-κB-RE荧光素酶报告基因的质粒转入HEK293细胞系,建立RANK-GloResponse NF-κB-RE-luc2P HEK 293细胞系。对细胞密度、显色方法、RANK配体（RANKL）的用量、地舒单抗稀释梯度等进行摸索后建立方法,根据2020年版《中华人民共和国药典》四部通则9101与9401,对方法的准确度、精密度、线性范围、专属性和耐用性进行考察。结果:成功建立报告基因法检测地舒单抗生物学活性,该方法的效价水平64%~156%的相对偏移（RB）均在±12.0%范围内,回归方程斜率为1.047 6,相关系数为0.988 1;精密度与准确度最大RSD为15.0%,对不同细胞代次、细胞密度及培养时间等考察耐用性的几何变异（GCV）最大为7.9%。细胞传代稳定性证实细胞传代在30代内P均>0.05。结论:本研究成功构建了基于报告基因法的细胞系,开发了适用于地舒单抗生物学活性检测的分析方法,且通过方法学验证,可为相关生物制品的质量控制提供可靠的技术支持。

关键词：地舒单抗,报告基因法,荧光素酶,RANK-RANKL信号通路,生物学活性,方法开发与验证,