龟甲胶和鹿角胶加工工艺过程中DNA降解规律和分子检测方法的研究*

来源：药物分析杂志2026年第5期北京时间：

作者：张全芳, 罗丽云, 毕武, 董书光, 步迅, 林永强

单位：1.山东省农业科学院生物技术研究所 济南 250100; 2.湖南东健药业有限公司,衡东 421411; 3.湖南省药品检验检测研究院,长沙 410001; 4.中国食品药品检定研究院 药品监管科学全国重点实验室,北京 100061

摘要：目的: 以龟甲胶和鹿角胶传统加工工艺过程中的样品为研究对象,探究其关键加工环节中基因组DNA的降解规律,并建立基于DNA条形码和巢式实时荧光定量PCR技术的正品基源分子鉴定方法。方法: 在龟甲胶和鹿角胶加工过程的原料、浓缩前、浓缩后、胶汁及成品阶段分别取样,优化全基因组DNA提取方法,利用分光光度计和琼脂糖凝胶电泳评估DNA质量及降解情况;利用动物通用引物线粒体CO I或Cytb基因进行DNA条形码鉴定,针对龟和鹿的线粒体16SrRNA序列设计2对特异性的引物和一对探针,为了检测PCR扩增体系,还引入外源性的内标质控。建立DNA条形码和巢式实时荧光定量PCR相结合的检测方法,确保其加工工艺全过程样品的准确性。结果: 龟甲胶在浓缩后和胶汁阶段的DNA纯度最高,而净龟甲和浓缩前阶段的DNA含量较高;鹿角胶加工过程中DNA的A260/A280均<1.7,胶汁阶段DNA的含量最高;琼脂糖凝胶电泳显示,2种胶类原料阶段均能可见清晰的单一条带,后续加工阶段出现不同程度的拖尾现象。DNA条形码技术可对原料和净原料进行准确鉴定,巢式实时荧光定量PCR可进行全过程的检测,且灵敏度高,原料和成品胶的检测限分别达0.16 ng和4 ng。结论: 龟甲胶和鹿角胶加工过程中,基因组DNA随工艺推进发生渐进性降解;所开发的巢式实时荧光定量PCR方法和DNA条形码技术相结合,快速、准确,可满足各加工阶段DNA溯源需求,为2种胶类药材基源鉴定提供可靠技术支撑。

关键词：龟甲胶,鹿角胶,DNA降解,DNA条形码检测,巢式实时荧光定量PCR,

基金资助：国家重点研发计划（中医药现代化专项）（N0.2023YFC3504102）;山东省重点研发计划（重大科技创新工程）项目（N0.2021CXGC010511）;山东省农业科学院齐鲁农科英才工程（创新类）学科带头人培养计划